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ELISA检测技术
ELISA是酶联免疫吸附实验( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速,目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。
1. ELISA技术类型

ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。这种测定方法中有3种必要的试剂:
1)固相的抗原或抗体:可作 ELISA 中载体的物质很多,最常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能,抗体或蛋白质抗原吸附其上后保留原来的免疫活性。
2)酶标记的抗原或抗体:在 ELISA 实施过程中,抗原和抗体的质量是实验是否成功的关键因素。本法要求所用抗原纯度高,抗体效价高、亲和力强。
3)标记酶直接关联的酶反应底物:ELISA 中所用的酶要求纯度高、催化反应的转化率高、专一性强、性质稳定、来源丰富、价格不贵、制备成的酶标抗体或抗原性质稳定,继续保留着它的活性部分和催化能力。最好在受检标本中不存在与标记酶相同的酶。另外它的相应底物应易于制备和保存,价格低廉,有色产物易于测定,光吸收高。ELISA 中最常用的酶为辣根过氧化酶(HRP)和从牛肠粘膜或大肠杆菌提取的碱性磷酸酶(AP)。
在实际应用中,通过不同的设计,出现直接ELISA、间接ELISA、夹心ELISA、竞争ELISA等不同的类型。
不同类型ELISA的优缺点
| 直接 ELISA | 间接 ELISA | 夹心 ELISA | 竞争ELISA | |
| 优点 | 1. 实验方案简短:节省时间和试剂。2. 无二抗交叉反应。 | 1. 信号放大:多个二抗将与一抗结合2. 高灵活性:同一个二抗可能被用于多个一抗 | 1. 高特异性:涉及检测同一抗原上的不同表位的两种抗体2. 适用于复杂样品3. 高灵活性和灵敏度:可使用直接和间接两种方法 | 1. 取决于选择的基本 ELISA2. 适用于小抗原 |
| 缺点 | 1. 潜在背景偏高:样品中所有的蛋白质都结合到表面。2. 无信号放大3. 低灵活性:一抗必须偶联 | 1. 和直接 ELISA 相比实验时间长2. 潜在的二抗交叉反应 | 1. 需要设计:有时候很难找到针对同一靶标、能识别其不同表位并能很好地协同工作的两种抗体。 | 1. 取决于选择的基本 ELISA |
1. 直接ELISA
原理:将抗原与固相载体连接,洗涤除去未结合的抗原及杂质。加酶标抗体进行孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。加底物反应。直接法主要用于测定抗原。

1)包被抗原
- 用PBS或碳酸盐缓冲液稀释抗原至终浓度20µg/mL。用吸管吸取50 µL稀释抗原到PVC微孔板上,按要求往后进行系列稀释。
- 在酶标板上覆盖封口膜,室温孵育2小时,或者4℃过夜。包被孵育时间需要优化。
- 倒掉孵育液,用PBS每孔200 µL洗板2次。在水池上轻甩倒掉洗液,在纸巾上轻拍酶标板除去残留液体。
2)封闭
- 用200 µL含5%脱脂奶粉或含5%血清的PBS缓冲液封闭酶标板上剩余的蛋白结合位点。
- 用封口膜覆盖酶标板室温至少孵育2小时,或者4℃过夜。
3)加抗体孵育
- 加入100 µL抗体,稀释到最佳浓度(参照说明书),使用前用封闭液现配。
- 用封口膜覆盖酶标板室温孵育2小时,该孵育时间可进行优化。尽管2小时的孵育通常可以获得足够偶强的信号,但如果获得信号较弱时,通过4℃孵育过夜可以获得较强信号。
- 用PBS洗板4次
4)检测
- 用多通道吸液器向每孔加入100 µL(或50 µL底物)。
- 显示出足够深的颜色后,再向每孔加终止液100 µL(如果必须)
- 用酶标仪读取每个孔的吸光度值。
2. 间接ELISA
原理:将抗原与固相载体相连结,形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。加入特异性一抗与固相抗原相结合,形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后,加酶标二抗。固相免疫复合物中的抗体与酶标二抗结合,从而间接地标记上酶。洗涤后,加底物显色。
通过将未知浓度样品与阳性对照标准曲线相比较,可精确定量。每块板都要带标准(做平行或者3份)和空白对照以保证精确性。

1)包被抗原
- 用PBS或碳酸盐缓冲液稀释抗原至终浓度20 µg/mL。用吸管吸取50 µL稀释抗原到PVC微孔板上的第一排孔,按要求往后进行系列稀释。
- 在酶标板上覆盖封口膜,室温孵育2小时,或者4℃过夜。包被孵育时间需要优化。
- 倒掉孵育液,用PBS每孔200 µL洗板3次。在水池上轻甩倒掉洗液,在纸巾上轻拍酶标板除去残留液体。
2)封闭
- 用200 µL含5%脱脂奶粉或含5%血清的PBS缓冲液封闭酶标板上剩余的蛋白结合位点。
- 用封口膜覆盖酶标板室温至少孵育2小时,或者4℃过夜。
- 用PBS洗板2次。
3)加一抗和二抗进行孵育
- 向每孔加入100 µL稀释好的一抗
- 用封口膜覆盖酶标板室温孵育2小时,该孵育时间需要进行优化,尽管2小时的孵育通常可以获得足够偶强的信号,单如果获得信号较弱时,通过4℃孵育过夜可以获得较强信号。
- 用PBS洗板4次
- 加入100 µL标记二抗,稀释到最佳浓度(参照说明书),使用前用封闭液现配
- 用封口膜覆盖酶标板室温孵育1-2小时。
- 用PBS洗板4次
4)检测
- 用多通道吸液器向每孔加入100 µL(或50 µL底物)。
- 显示出足够深的颜色后,再向每孔加终止液100 µL(如果必须)
- 用酶标仪读取每个孔的吸光度值。
5)数据分析
根据连续稀释的数据制作一条标准曲线,X轴为浓度(对数转换),Y轴为吸光度值(线性)。将样品吸光度值代入标准曲线求出浓度。
3. 夹心ELISA
原理:双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子,但不适用于小分子抗原。将特异性抗体(捕获抗体)与固相载体连接,形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。加入待检样品,保温孵育。样品中的特异性抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其它未结合物质。加酶标抗体(检测抗体)保温孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。加底物反应。

1)包被捕获抗体
- 用碳酸盐/重碳酸盐缓冲液(pH7.4)稀释捕获抗体至浓度1-10 µg/mL,包被酶标板。
- 用封口膜覆盖酶标板,于4℃孵育过夜。
- 倒掉包被液,用PBS每孔200 µL洗板2次。在水池上轻甩倒掉洗液,在纸巾上轻拍酶标板除去残留液体。
2)封闭和加样品
- 封闭包被后孔内残留的蛋白结合位点,每孔加200 µL,含5%脱脂奶粉的PBS封闭液。
- 用封口膜覆盖酶标板,室温孵育至少1-2 小时或者如果方便的话,4℃孵育过夜。
- 每孔加100 µL稀释的样品。在精确定量测定时,通常将未知浓度样品与阳性对照标准曲线相比较,每块板都要带标准和空白对照以保证精确性。37℃孵育90 min
- 倒掉样品,每孔用200 µLPBS洗板2次。
3)用检测抗体和二抗先后进行孵育
- 每孔加入100 µL稀释好的检测抗体。
- 用封口膜覆盖酶标板,室温孵育2小时
- 用PBS洗板4次
- 加入标记的二抗,使用前用封闭液快速稀释至最佳浓度(根据说明书)
- 用封口膜覆盖酶标板,失望呢孵育1-2 小时。
- 用PBS洗板4次
4)检测
- 用多通道吸液器向每孔加入100 µL(或50 µL底物)。
5)数据分析
根据连续稀释的数据制作一条标准曲线,X轴为浓度(对数转换),Y轴为吸光度值(线性)。将样品吸光度值代入标准曲线求出浓度。
4.竞争ELISA
竞争性ELISA是一种在抗原很小且仅具有一个表位或抗体结合位点时常用的策略。 该方法的一种变化是标记纯化的抗原而不是抗体。 来自样品的未标记抗原和标记抗原竞争结合捕获抗体。 与仅使用标记抗原的测定孔相比,来自纯化抗原的信号减少表明样品中存在抗原。

2. ELISA在不同研究领域中的应用
ELISA技术是特定靶标蛋白质定量的金标准,提供快速、稳定且易于分析的结果。ELISA 可用于研究领域中的许多靶标,如下表:
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细胞因子、趋化因子和生长因子ELISA试剂盒 |
本系列产品范围较广,涵盖了大量分泌型循环蛋白,如细胞因子、趋化因子和生长因子,用于免疫学和炎症研究。这些蛋白质对细胞发育、增殖、迁移、分化和成熟来说至关重要。 |
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免疫肿瘤学ELISA试剂盒 |
免疫肿瘤学 ELISA 试剂盒可检测可溶性免疫检查点分子,有助于提供癌症免疫的全面信息。这些检测试剂盒为血清、血浆和细胞培养上清液样品提供准确的蛋白质定量。 |
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神经生物学ELISA试剂盒 |
我们为进行神经系统疾病或神经科学相关研究的研究人员提供高品质 ELISA 试剂盒。这些“neuro(神经)ELISA”试剂盒在为各种样品类型的 AB(β-淀粉样蛋白或淀粉样蛋白 β)、tau 和 α-突触核蛋白提供准确、灵敏和快速的蛋白质定量。 |
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磷酸化特异性ELISA 试剂盒 |
磷酸化特异性 ELISA 试剂盒专为研究信号通路中涉及的细胞内蛋白的研究人员而设计。这些检测试剂盒为细胞裂解液中的总特异性磷酸化修饰或切割位点蛋白质提供准确、灵敏和快速蛋白质定量。 |
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免疫球蛋白 ELISA 试剂盒 |
特异性免疫球蛋白和同型分析 ELISA 试剂盒为杂交瘤细胞生长期间和之后定性和定量抗体类别、亚类和同型提供了一种快速、灵敏且简便的方法,用于评估免疫应答。 |
1. 细胞因子、趋化因子和生长因子 ELISA 试剂盒
细胞因子(cytokine,CK)是细胞经刺激活化后,分泌的一类具有高活性的小分子蛋白质,细胞因子是介导细胞间信息传递,参与免疫细胞分化发育、免疫应答、免疫调节及炎症反应的重要免疫分子。
细胞因子不仅与免疫状况和炎症反应有关,而且还与神经退行性疾病和癌症等疾病有关。 可准确定量血清、血浆和组织培养上清液中的细胞因子,从而使研究人员能够充分了解生理条件下疾病的发病机制。
Invitrogen ELISA试剂盒包含了各种细胞因子,如白介素(IL)、集落刺激因子(CSF)、干扰素(IFN)、肿瘤坏死因子(TNF)、集落刺激因子(CSF)、趋化因子(Chemokine)和生长因子(GF)等。

注:图为炎症过程中细胞因子之间的相互作用
细胞因子、趋化因子和生长因子畅销ELISA试剂盒:
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货号 |
名称 |
样品类型 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
注:表中产品为 Platinum ELISA(白金 ELISA)
2. 免疫肿瘤学ELISA试剂盒
最近许多药物的研究策略都是针对免疫检查点标记物来增强抗肿瘤的免疫性。 免疫检查点是维持正常免疫反应和保护组织免受免疫激活损伤的重要细胞途径。 癌细胞免疫检查点失调,并将其用作免疫抵抗的机制。 例如,PD-1使癌细胞免受T细胞识别,从而防止了T细胞的攻击;另一个例子是CTLA-4,它在抗原提呈细胞引发T细胞的过程中发挥作用。 抗体阻断CTLA-4受体可激活T细胞,从而产生抗癌免疫反应。
免疫肿瘤学畅销ELISA试剂盒:
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货号 |
名称 |
样品类型 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、上清液 |
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血清、血浆、上清液、羊水 |
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血清、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液、细胞裂解液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
注:表中 BMS××× 为 Platinum ELISA(白金 ELISA);BMS×××INST 为 Instant ELISA(一步法 ELISA)
3. 神经生物学ELISA试剂盒
ELISA能够定量多种生物学来源的蛋白质,包括多种物种的血清,血浆和CSF(脑脊液)。 我们提供了用于研究与神经退行性疾病有关的几种蛋白质的ELISA检测试剂盒,例如:
- 淀粉样蛋白β(Aβ,β淀粉样蛋白或Abeta):与阿尔茨海默病有关,是阿尔茨海默病患者大脑中淀粉样斑块的主要成分。
- Tau:是一种稳定的微管蛋白,如果不能正常发挥功能,则可能与神经系统的病理和痴呆有关。
- α突触核蛋白(α-突触核蛋白):在维持突触前末端突触小泡的供应中起重要作用,也可能有助于调节多巴胺的释放。
神经生物学畅销ELISA试剂盒:
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货号 |
名称 |
样品类型 |
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KHB0041 |
Tau (Total) Human ELISA Kit |
上清液、脑脊液 |
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KHB3441 |
Amyloid beta 42 Human ELISA Kit |
上清液、脑脊液、组织匀浆 |
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KHB3481 |
Amyloid beta 40 Human ELISA Kit |
上清液、脑脊液、组织匀浆 |
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KHB7031 |
Tau (Phospho) [pS396] Human ELISA Kit |
上清液、脑脊液 |
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KHB7041 |
Tau (Phospho) [pS199] Human ELISA Kit |
上清液、细胞裂解液、脑脊液、脑匀浆 |
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KHB8051 |
Tau (Phospho) [pT231] Human ELISA Kit |
上清液、脑脊液、组织匀浆 |
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KHB3491 |
Amyloid beta (Aggregated) Human ELISA Kit |
上清液、脑脊液、组织匀浆、心室液 |
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KHB0051 |
Amyloid Precursor Protein Human ELISA Kit |
细胞裂解液、脑脊液 |
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KHO0631 |
Tau (Phospho) [pT181] Human ELISA Kit |
上清液、脑脊液、组织匀浆 |
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KMB7011 |
Tau (Total) Mouse ELISA Kit |
上清液、细胞裂解液、脑匀浆 |
注:表中产品为 Platinum ELISA(白金 ELISA)
4. 磷酸特异性ELISA试剂盒
真核细胞中大约30%的蛋白经过磷酸化修饰,调控细胞活性,包括细胞周期、分化、代谢和神经元通讯。而异常的磷酸化状态涉及许多人类疾病,包括癌症。研究关键蛋白质靶标的磷酸化和翻译后修饰对于更好地了解疾病背后的机制至关重要。其中ELISA已逐渐成为测定蛋白磷酸化的一种有力方法,为研究信号通路中涉及的细胞内蛋白的研究人员提供了有力支持。
针对各种疾病(包括STAT3,CREB,PRAS40,p38,AMPK alpha,PTK2,Caspase 3信号传导)涉及的许多关键靶标和信号传导途径的磷酸化,我们为您提供两种磷酸化ELISA 试剂盒用于细胞裂解液中的总特异性磷酸化修饰或切割位点蛋白质提供准确、灵敏和快速的定性、定量分析。
1) Platinum 磷酸化ELISA试剂盒
Platinum 磷酸化ELISA检测试剂盒采用了标准的抗体夹心法检测磷酸化蛋白,包含了预包被的捕获抗体,检测抗体和其他试剂,并且提供标准蛋白,可生成用于定量的标准曲线。
Platinum 磷酸化ELISA试剂盒的特点:
定量 — 获得定量数据,为蛋白免疫印迹提供数据支撑
特异性 — 含两种针对靶标的抗体,比蛋白质印迹法具有更好的特异性
灵敏度 — 只需要2000-3000个细胞
中通量 — 96孔,可在4小时内完成结果
Platinum 磷酸化ELISA试剂盒实验流程:

Platinum 磷酸化ELISA试剂盒产品:
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货号 |
名称 |
样品类型 |
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KHO0481 |
STAT3 (Phospho) [pY705] Multispecies ELISA Kit |
细胞裂解液 |
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KHO0651 |
AMPK alpha-1,2 (Phospho) [pT172] Human ELISA Kit |
细胞裂解液 |
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KHO0241 |
CREB (Phospho) [pS133] Human ELISA Kit |
细胞裂解液 |
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KHR9121 |
IR (Phospho) [pY1158] Human ELISA Kit |
细胞裂解液 |
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KHO0421 |
PRAS40 (Phospho) [pT246] Human ELISA Kit |
细胞裂解液 |
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KHO0441 |
FAK (Phospho) [pY397] Human ELISA Kit |
细胞裂解液 |
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KHO0111 |
AKT (Phospho) [pS473] Human ELISA Kit |
细胞裂解液 |
2) InstantOne ELISA试剂盒
InstantOne 是1小时即可完成的一步法磷酸化蛋白分析,以超出行业标准的灵敏度来检测总靶标与磷酸化靶标。与传统的夹心ELISA相比又有独特性,仅有一个清洗步骤,减少操作时间,可实现更大的灵活性、易用性。在实验操作过程中先加入样品/negative control/positive control, 再同时加入预混好的抗体混合物(含捕获抗体和检测抗体),捕获抗体通过特有机制与加样板结合;靶标蛋白与溶液中捕获抗体和检测抗体结合后,通过洗涤即可检测特异性蛋白的表达。
InstantOne除了简便外,还增添了灵活性。由于抗体并未预先包被在加样孔,因此可在同一块板的不同加样孔中同时分析几种不同靶标,即在不同加样孔中加入相同的样本裂解物,并添加不同的抗体对试剂即可实现多种靶标同时检测。
InstantOne ELISA试剂盒的特点:
快速 — 节约时间,耗时约为传统ELISA的1/3
简单 — 仅有一个清洗步骤,减少操作时间,提高灵敏度和准确度
灵活 — 在一块板可同时对总靶标和磷酸化靶标进行对比分析或是多种磷酸化蛋白家族的分析
灵敏 — 超出行业标准,仅需2000到3000个细胞
相容 — 传统的酶标仪读取数据
InstantOne ELISA试剂盒实验流程:

InstantOne畅销ELISA试剂盒:
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货号 |
名称 |
样品类型 |
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85-86112-11 |
STAT5 alpha/beta (Phospho) [pY694/pY699] Human InstantOne ELISA Kit |
细胞裂解液 |
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85-86012-11 |
ERK1/ERK2(Phospho)[pT202/pY204]/[pT185/pY187]Multispecies InstantOne ELISA Kit |
细胞裂解液 |
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85-86083-11 |
NFkB p65 (Total/Phospho) Human InstantOne ELISA Kit |
细胞裂解液 |
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85-86042-11 |
AKT (Phospho) [pS473] Multispecies InstantOne ELISA Kit |
细胞裂解液 |
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85-86103-11 |
STAT3 (Total/Phospho) Human InstantOne ELISA Kit |
细胞裂解液 |
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85-86192-11 |
SMAD3 (Phospho) [pS423/pS425] Human InstantOne ELISA Kit |
细胞裂解液 |
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85-86013-11 |
ERK1/ERK2 (Total/Phospho) Multispecies InstantOne ELISA Kit |
细胞裂解液 |
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85-86102-11 |
STAT3 (Phospho) [pY705] Human InstantOne ELISA Kit |
细胞裂解液 |
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85-86011-11 |
ERK1/ERK2 (Total) Multispecies InstantOne ELISA Kit |
细胞裂解液 |
5. 免疫球蛋白ELISA试剂盒
免疫球蛋白是指具有抗体活性的动物蛋白,主要存在于血浆中,也见于其他体液、组织和一些分泌液中。Invitrogen免疫球蛋白ELISA试剂盒可实现准确定量, 选择涉及人,小鼠和大鼠物种的IgG,IgA,IgE和IgM亚类。
对于一些疾病的研究,比如系统性红斑狼疮:多见于 lgG、lgA、IgM 的升高;类风湿性关节炎:多见于 IgG、IgM 的升高;巨球蛋白血症:产生 IgM 的浆细胞恶性增生,血清中IgM可高达20g/L以上;IgE升高:常见于超敏反应性疾病,如过敏性鼻炎、外源性哮喘、枯草热、慢性荨麻疹,以及寄生虫感染、急慢性肝炎、药物所致的间质性肺炎、支气管肺曲菌病、类风湿性关节炎等。
人免疫球蛋白ELISA试剂盒:
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货号 |
名称 |
样品类型 |
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血清、血浆 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆 |
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血清、血浆 |
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血清、血浆 |
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血清、血浆 |
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血清、血浆 |
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血清、血浆 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆 |
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血清、血浆 |
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血清、血浆 |
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血清、血浆 |
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血清、血浆 |
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血清、血浆 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
注:表中 BMS××× 和 EHIGG1为 Platinum ELISA(白金 ELISA);88×××22(含 96孔板)/ 88(不含 96孔板)为未包被 ELISA 试剂盒
小鼠免疫球蛋白ELISA试剂盒:
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货号 |
名称 |
样品类型 |
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血清、血浆、上清液 |
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血浆、血清、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
注:表中 EMIGG2A / EMIGA / EMIGHE为 Platinum ELISA(白金 ELISA);88×××22(含 96孔板)/ 88(不含 96孔板)为未包被ELISA试剂盒
大鼠免疫球蛋白ELISA试剂盒:
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货号 |
名称 |
样品类型 |
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血浆、血清、上清液 |
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血浆、血清、上清液 |
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血浆、血清、上清液 |
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血浆、血清、上清液 |
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血浆、血清、上清液 |
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血浆、血清、上清液 |
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血浆、血清、上清液 |
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血浆、血清、上清液 |
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血浆、血清、上清液 |
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血浆、血清、上清液 |
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血浆、血清、上清液 |
注:表中 88×××22(含 96孔板)/ 88(不含 96孔板)为未包被 ELISA试剂盒
3. 如何选择适合您实验要求的ELISA检测?
不同种类ELISA 试剂盒总有一款适合您
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Platinum ELISA |
更准确的定量数据、更低的孔间差异,确保数据的准确性和稳定性 |
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Instant ELISA |
创新的一步法ELISA试剂盒,减少步骤和操作时间,确保数据的准备性和稳定性 |
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High Sensitivity ELISA |
灵敏度高,检测低含量的细胞因子的不二之选 |
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InstantOne ELISA |
1小时内/一次洗涤的磷酸化ELISA试剂盒,快速方便的检测总靶标和磷酸化靶标的蛋白含量 |
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Ready-Set-Go ELISA |
价格实惠,每款试剂盒都包含实验所需要的试剂,还可选购96孔板 |
1. Platinum ELISA(白金ELISA)
即用型Platinum ELISA试剂盒适用于多种样本类型中同一种因子的定量,可以提供更低的板内及板间差异和稳定的定量数据。
即用型Platinum ELISA保证了批次间的一致性,并确保整个研究过程中数据的一致性和更可靠的ELISA结果。
目前已有超过170 种高质量的目标蛋白ELISA试剂盒,主要包括人、小鼠、大鼠、犬类、猴、马、猪、牛、猫等。
Platinum ELISA试剂盒组份:

注:Platinum ELISA 提供 1 个和 10 个加样板(96 孔)的试剂盒规格,试剂盒包括执行分析所需的全部试剂。
Platinum ELISA试剂盒工作流程:

Platinum ELISA试剂盒:
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货号 |
名称 |
样品类型 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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EH2IL2 |
IL-2 Human ELISA Kit |
血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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KHB3481 |
Amyloid beta 40 Human ELISA Kit |
上清液、脑脊液、组织匀浆 |
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血清、血浆 |
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血清 |
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KHB0041 |
IgE Mouse ELISA Kit |
血清、血浆、上清液 |
2. Instant ELISA(一步法ELISA试剂盒)
Instant ELISA试剂盒包含ELISA实验所有必需成分,包括捕获抗体和冻干检测抗体,链霉亲和素-HRP和样品稀释剂。 此外,还单独提供了包含标准曲线孔条。随时使用,既节省时间又节省了加样孔,留出了更多时间进行其它研究工作。
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传统ELISA的17个步骤 |
Instant ELISA的7个步骤 |
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01 |
活化加样板 |
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02 |
重溶标准蛋白 |
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03 |
将样本稀释液添加到样本孔 |
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04 |
梯度稀释标准曲线 |
01 |
加样板活化 |
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05 |
添加样本稀释液 |
02 |
添加样本 |
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06 |
添加样本 |
03 |
孵育 |
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07 |
稀释生物素共轭物 |
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08 |
添加生物素共轭物 |
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09 |
孵育 |
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10 |
制备链霉亲和素-HRP |
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11 |
清洗 |
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12 |
添加链霉亲和素-HRP |
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13 |
孵育 |
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14 |
清洗 |
04 |
清洗 |
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15 |
添加TMB底物 |
05 |
添加TMB底物 |
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16 |
添加终止液 |
06 |
添加终止液 |
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17 |
计算结果 |
07 |
计算结果 |
注:一步法ELISA 的操作步骤更少,对比传统的ELISA 17个步骤减少到7个步骤,从而减少上手操作时间,减少了实验误操作机会,同时提高了工作效和数据准确度。
Instant ELISA试剂盒组份:

注:Instant ELISA(96 孔/板)试剂盒包括了分析所需的全部试剂。两个独立包装,试剂盒额外附标准曲线孔条,可充分利用全部96个加样孔来检测样本。
Human Instant ELISA试剂盒:
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货号 |
名称 |
规格 |
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128 tests |
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128 tests |
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BMS2029INST |
MIP-1a (CCL3) Human Instant ELISA™ Kit |
128 tests |
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128 tests |
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128 tests |
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128 tests |
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128 tests |
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128 tests |
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128 tests |
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BMS209INST |
CD44std (Soluble) Human Instant ELISA™ Kit |
128 tests |
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128 tests |
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128 tests |
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BMS206INST |
L-Selectin/CD62L (Soluble) Human Instant ELISA™ Kit |
128 tests |
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128 tests |
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128 tests |
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128 tests |
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128 tests |
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128 tests |
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128 tests |
Mouse Instant ELISA产品:
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货号 |
名称 |
规格 |
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BMS606INST |
IFN gamma Mouse Instant ELISA™ Kit |
128 tests |
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128 tests |
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128 tests |
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128 tests |
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BMS6007INST |
MCP-5 Mouse Instant ELISA™ Kit |
128 tests |
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128 tests |
Monkey Instant ELISA产品:
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货号 |
名称 |
规格 |
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BMS651INST |
CD31/PECAM (Soluble) Monkey Instant ELISA™ Kit |
128 tests |
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128 tests |
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BMS642INST |
IL-10 Monkey Instant ELISA™ Kit |
128 tests |
|
128 tests |
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BMS653INST |
TNFR1 (Soluble) Monkey Instant ELISA™ Kit |
128 tests |
3. High Sensitivity ELISA(高灵敏度ELISA试剂盒)
eBioscience 高灵敏度 ELISA 通过额外的信号放大步骤来进一步增强信号,该步骤使用了酪胺信号放大试剂来生成多个生物素结合位点,从而可结合更多的链霉亲和素 -HRP分子。反应的生物素基酪胺与加样孔中的HRP数量成比例关系。这一放大步骤倍增了HRP分子数量,也等比例的让最终TMB底物的信号增强。
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特点: • 高灵敏度:检测 0.1 pg/mL 的低细胞因子浓度,获得可靠的定量结果
• 样本量少:50μL 样本量,适 用于有限的样本资源
• 方便易用:即用型试剂盒包含全部所需的试剂
• 设备的兼容性:使用标准的酶标仪(在 450nm 处进行吸收波长测量) |
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High Sensitivity ELISA试剂盒组份:

注:高灵敏度ELISA(每个加样板96孔)试剂盒规格中包括了执行分析所需的全部试剂。
High Sensitivity ELISA试剂盒产品:
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货号 |
名称 |
样品类型 |
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血浆、血清、上清液 |
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血浆、血清、上清液 |
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BMS601HS |
IL-2 Mouse ELISA Kit, High Sensitivity |
血浆、血清、上清液 |
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BMS613HS |
IL-4 Mouse ELISA Kit, High Sensitivity |
血浆、血清、上清液 |
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BMS2017HS |
IL-17A Human ELISA Kit, High Sensitivity |
血浆、血清、上清液 |
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BMS213HS |
IL-6 Human ELISA Kit, High Sensitivity |
血浆、血清、上清液 |
|
血浆、血清、上清液 |
4.InstantOne ELISA(磷酸化ELISA试剂盒)
InstantOne ELISA 仅需一次清洗步骤,减少操作的时间,可实现更大的灵活性、易用性。由于抗体并未预先包被在加样孔中, 因此可在同一块加样板的不同加样孔中,同时分析几种不同的靶标。只需要在不同加样孔中加入相同的样本裂解物并添加不同的抗体对试剂即可实现这一目的。
InstantOne ELISA试剂盒组份:

注:InstantOne ELISA(每个加样板 96 孔)试剂盒规格中包括了执行分析所需的全部试剂。
InstantOne ELISA试剂盒工作流程:

InstantOne ELISA试剂盒产品:
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货号 |
名称 |
样品类型 |
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85-86112-11 |
STAT5 alpha/beta (Phospho) [pY694/pY699] Human InstantOne™ ELISA Kit |
细胞裂解液 |
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85-86012-11 |
ERK1/ERK2 (Phospho) [pT202/pY204]/[pT185/pY187] Multispecies InstantOne™ ELISA Kit |
细胞裂解液 |
|
85-86083-11 |
NFkB p65 (Total/Phospho) Human InstantOne™ ELISA Kit |
细胞裂解液 |
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85-86042-11 |
AKT (Phospho) [pS473] Multispecies InstantOne™ ELISA Kit |
细胞裂解液 |
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85-86103-11 |
STAT3 (Total/Phospho) Human InstantOne™ ELISA Kit |
细胞裂解液 |
|
85-86192-11 |
SMAD3 (Phospho) [pS423/pS425] Human InstantOne™ ELISA Kit |
细胞裂解液 |
|
85-86013-11 |
ERK1/ERK2 (Total/Phospho) Multispecies InstantOne™ ELISA Kit |
细胞裂解液 |
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85-86092-11 |
STAT1 (Phospho) [pY701] Human InstantOne™ ELISA Kit |
细胞裂解液 |
|
85-86102-11 |
STAT3 (Phospho)[pY705] Human InstantOne™ ELISA Kit |
细胞裂解液 |
|
85-86011-11 |
ERK1/ERK2 (Total) Multispecies InstantOne™ ELISA Kit |
细胞裂解液 |
5. Ready-Set-Go ELISA(未包被自定义ELISA试剂盒)
成本最低:实惠的非即用型ELISA 试剂盒包含了运行ELISA 所需的试剂,其中包括针对 ELISA 优化的抗体对、标准蛋白、检测抗体、清洗和包被缓冲剂(加样板为选购)。
Ready-SET-Go! ELISA 是经验丰富但预算有限用户的理想选择。
Ready-Set-Go ELISA试剂盒组份:

注:Ready-SET-Go ELISA提供2块、10块和20块加样板(96孔,选购)的试剂盒规格,洗涤液和终止液需单独购买。
Ready-Set-Go ELISA试剂盒工作流程:


Ready-Set-Go ELISA试剂盒产品:
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货号 |
名称 |
样品类型 |
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血清、血浆、上清液 |
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88-7066-22 |
IL-6 Human Uncoated ELISA Kit with Plates |
血清、血浆、上清液 |
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血清、血浆、上清液 |
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血浆、血清、上清液 |
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血浆、血清、上清液 |
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血浆、血清、上清液 |
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血浆、血清、上清液 |
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88-52169-22 |
MCP-2/CCL8 Human Uncoated ELISA Kit with Plates |
血浆、血清、上清液 |
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血浆、血清、上清液 |
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血浆、血清、上清液 |
注:88-XXXX-88/77, 不带96孔板;88-XXXX-86/76/22,含96孔板
4. 优化ELISA检测
ELISA(酶联免疫吸附试验)是广泛应用于生物医学研究中的检测工具,但如果没有经过细致的优化和精心的操作,结果往往会令人失望。无论是信号波动,还是曲线失真,这些问题往往直接影响到实验的可靠性。
1. 不同种类预包被ELISA板的选择
对于抗体和蛋白质,通过被动吸附包被板通常效果很好。但是,被动吸附可能会产生问题,包括方向不正确,变性,固定效率差以及污染物与目标分子的结合。可以使用Protein A,G或A / G包被的板将抗体通过Fc区附着到微孔板上,从而正确地定向它们,并保留其抗原结合能力。融合蛋白可以使用谷胱甘肽,金属螯合物或捕获抗体包被的板以适当的方向连接到微孔板上。通常不能通过被动吸附有效结合的肽和其它小分子可以被生物素化,并高效附着在链霉亲和素或中性亲和素蛋白包被的微孔板上。生物素化抗体也可以固定在预先涂有生物素结合蛋白的板上。
有96孔和384孔格式(黑色,透明或白色)的高性能表面包被板(预包被和预封闭)可供选择。
1. 蛋白包被的免疫测定板:
1)Protein A包被板:
- 可牢固结合人,兔,豚鼠,猪,狗和恒河猴的IgG
- 可牢固结合小鼠IgG2a,IgG2b和IgG3
- 可结合抗体的Fc区以获得最佳方向
2)Protein G包被板:
- 结合多物种的IgG,包括人类,小鼠,兔子,绵羊和山羊
- 仅结合IgG - 与其它抗体类别无交叉反应
- 结合抗体的Fc区以获得最佳方向
3)Protein A / G包被板:
- Protein A/G融合蛋白,包含四个来自Protein A的抗体结合位点和两个来自Protein G的抗体结合位点
- 可以结合几乎所有种属的IgG,因为它包含了Protein A和G的结合特异性
- 结合抗体的Fc区,确保最佳方向
- 在宽pH范围内都能很好地结合
4)Protein L包被板:
- 可结合所有种类的免疫球蛋白(IgG,IgM,IgA,IgE和IgD)
- 结合κ轻链(人I,III,IV和小鼠I)的VL区,而不会干扰抗原结合位点
- 结合Fab片段和ScFv
- 不结合牛,山羊或绵羊免疫球蛋白
- 与兔免疫球蛋白结合比较弱
- 预封闭以减少非特异性结合
| 货号 | 名称 | 规格 |
| 15155 | Pierce™ Protein A Coated Plates, Black, 96-Well | 5 plates |
| 15132 | Pierce™ Protein A Coated Plates, Clear, 8-Well Strip | 5 plates |
| 15130 | Pierce™ Protein A Coated Plates, Clear, 96-Well | 5 plates |
| 15154 | Pierce™ Protein A Coated Plates, White, 96-Well | 5 plates |
| 15138 | Pierce™ Protein A/G Coated Plates, Clear, 8-Well Strip | 5 plates |
| 15157 | Pierce™ Protein G Coated Plates, Black, 96-Well | 5 plates |
| 15133 | Pierce™ Protein G Coated Plates, Clear, 8-Well Strip | 5 plates |
| 15131 | Pierce™ Protein G Coated Plates, Clear, 96-Well | 5 plates |
| 15156 | Pierce™ Protein G Coated Plates, White, 96-Well | 5 plates |
| 15190 | Pierce™ Protein L Coated Plates, Clear, 96-Well | 5 plates |
5)二抗包被的板 (Secondary antibody–coated plates)
当可获得的抗体很少或直接吸附到聚苯乙烯板上时会变性,抗体包被的板是结合测定的理想选择。 因为这些板是IgG特异性的,所以不需要纯化的抗体。 pierce抗体包被的板可用于直接,间接,竞争或夹心ELISA测定,并且可用于比色测定,白色用于化学发光测定和黑色用于荧光测定。
| 货号 | 名称 | 规格 |
| 15134 | Pierce™ Goat Anti-Mouse IgG Antibody Coated Plates, Clear, 96-Well | 5 plates |
| 15135 | Pierce™ Goat Anti-Rabbit IgG Antibody Coated Plates, Clear, 96-Well | 5 plates |
| 15136 | Pierce™ Goat Anti-Rabbit IgG Antibody Coated Plates, White, 96-Well | 5 plates |
| 15137 | Pierce™ Goat Anti-Rabbit IgG Antibody Coated Plates, Black, 96-Well | 5 plates |
| 15234 | Pierce™ Goat Anti-Mouse IgG Antibody Coated Plates, White, 96-Well | 5 plates |
| 15334 | Pierce™ Goat Anti-Mouse IgG Antibody Coated Plates, Black, 96-Well | 5 plates |
2. 生物素包被板
1)链霉亲和素包被板(streptavidin Coated plates):
- 链霉亲和素包被的板—预封闭的即用型聚苯乙烯板,用于结合生物素化的抗体或用于ELISA和其它目标特异性测定的探针
- 链霉亲和素包被高容量板—用于结合生物素化的寡核苷酸和肽,具有比其它市售板更高的结合效率
- 链霉亲和素包被的高灵敏度板—生物素结合微孔板,包被后最大程度地提高了生物素化探针的捕获效率,并在低水平目标分析物测定中控制背景。
| 货号 | 名称 | 规格 |
| 15118 | Pierce™ Streptavidin Coated Plates, White, 96-Well | 5 plates |
| 15119 | Pierce™ Streptavidin Coated Plates, Black, 96-Well | 5 plates |
| 15120 | Pierce™ Streptavidin Coated Plates, Clear, 8-Well Strip | 5 plates |
| 15121 | Pierce™ Streptavidin Coated Plates, Clear, 8-Well Strip | 5 plates |
| 15122 | Pierce™ Streptavidin Coated Plates, Clear, 8-Well Strip | 5 x 5 plates |
| 15124 | Pierce™ Streptavidin Coated Plates, Clear, 96-Well | 5 plates |
| 15125 | Pierce™ Streptavidin Coated Plates, Clear, 96-Well | 5 plates |
| 15126 | Pierce™ Streptavidin Coated Plates, Clear, 96-Well | 5 x 5 plates |
| 15218 | Pierce™ Streptavidin Coated Plates, White, 96-Well | 5 plates |
| 15219 | Pierce™ Streptavidin Coated Plates, Black, 96-Well | 5 plates |
| 15405 | Pierce™ Streptavidin Coated Plates, Clear, 384-Well | 5 plates |
| 15407 | Pierce™ Streptavidin Coated Plates, Black, 384-Well | 5 plates |
| 15500 | Pierce™ Streptavidin Coated High Capacity Plates, Clear, 96-Well | 5 plates |
| 15501 | Pierce™ Streptavidin Coated High Capacity Plates, Clear, 8-Well Strip | 5 plates |
| 15502 | Pierce™ Streptavidin Coated High Capacity Plates, White, 96-Well | 5 plates |
| 15503 | Pierce™ Streptavidin Coated High Capacity Plates, Black, 96-Well | 5 plates |
| 15504 | Pierce™ Streptavidin Coated High Capacity Plates, Clear, 384-Well | 5 plates |
| 15505 | Pierce™ Streptavidin Coated High Capacity Plates, White, 384-Well | 5 plates |
| 15506 | Pierce™ Streptavidin Coated High Capacity Plates, Black, 384-Well | 5 plates |
| 15520 | Pierce™ Streptavidin Coated High Sensitivity Plates, Clear, 8-Well Strip | 5 plates |
| 15525 | Pierce™ Streptavidin Coated High Sensitivity Plates, Black, 8-Well Strip | 5 plates |
| 15115 | Pierce™ Biotin-Binding Plate Sample Pack | 4 plates |
2)中性亲和素包被板(NeutrAvidin Coated plates):
- NeutrAvidin蛋白包被的板-预封闭且可立即使用的聚苯乙烯板,用于结合生物素化抗体或用于ELISA和其他目标特异性测定的探针
- NeutrAvidin包被高容量板-设计用于结合生物素化的寡核苷酸和肽,具有比其他市售板更高的结合效率
- NeutrAvidin包被的高灵敏度板—生物素结合微孔板,可进行包被以最大程度地提高生物素化探针的捕获效率,并在低水平目标分析物测定中控制背景。
| 货号 | 名称 | 规格 |
| 15116 | Pierce™ NeutrAvidin™ Coated Plates, White, 96-Well | 5 plates |
| 15117 | Pierce™ NeutrAvidin™ Coated Plates, Black, 96-Well | 5 plates |
| 15123 | Pierce™ NeutrAvidin™ Coated Plates, Clear, 96-Well | 5 plates |
| 15127 | Pierce™ NeutrAvidin™ Coated Plates, Clear, 8-Well Strip | 5 plates |
| 15128 | Pierce™ NeutrAvidin™ Coated Plates, Clear, 8-Well Strip | 5 plates |
| 15129 | Pierce™ NeutrAvidin™ Coated Plates, Clear, 96-Well | 5 plates |
| 15216 | Pierce™ NeutrAvidin™ Coated Plates, White, 96-Well | 5 plates |
| 15217 | Pierce™ NeutrAvidin™ Coated Plates, Black, 96-Well | 5 plates |
| 15400 | Pierce™ NeutrAvidin™ Coated Plates, Clear, 384-Well | 5 plates |
| 15401 | Pierce™ NeutrAvidin™ Coated Plates, White, 384-Well | 5 plates |
| 15402 | Pierce™ NeutrAvidin™ Coated Plates, Black, 384-Well | 5 plates |
| 15507 | Pierce™ NeutrAvidin™ Coated High Capacity Plates, Clear, 96-Well | 5 plates |
| 15508 | Pierce™ NeutrAvidin™ Coated High Capacity Plates, Clear, 8-Well Strip | 5 plates |
| 15509 | Pierce™ NeutrAvidin™ Coated High Capacity Plates, White, 96-Well | 5 plates |
| 15510 | Pierce™ NeutrAvidin™ Coated High Capacity Plates, Black, 96-Well | 5 plates |
| 15511 | Pierce™ NeutrAvidin™ Coated High Capacity Plates, Clear, 384-Well | 5 plates |
| 15512 | Pierce™ NeutrAvidin™ Coated High Capacity Plates, White, 384-Well | 5 plates |
| 15513 | Pierce™ NeutrAvidin™ Coated High Capacity Plates, Black, 384-Well | 5 plates |
| 15530 | Pierce™ NeutrAvidin™ Coated High Sensitivity Plates, Clear, 8-Well Strip | 5 plates |
| 15115 | Pierce™ Biotin-Binding Plate Sample Pack | 4 plates |
3. GST融合蛋白(GST-fusion proteins):
通过Spacer交联到聚合物表面的谷胱甘肽能够特异性结合GST,GST通常通过基因工程改造表达在融合蛋白中。 Spacer使表面结合反应性最大化,同时最小化非特异性结合,并且共价键减少了浸出效应的发生。 表面不需要被封闭,因此获得高的信噪比。
这些谷胱甘肽包被的板可用于细胞裂解液的分析,以确定表达系统中产生的GST融合蛋白的存在和浓度。 或者利用融合蛋白GST标签结合的特性,可将包被板用于捕获和包被GST融合蛋白,以进行涉及重组蛋白的后续结合测定(蛋白相互作用或特异性抗体)。
| 货号 | 名称 | 规格 |
| 15140 | Pierce™ Glutathione Coated Plates, Clear, 8-Well Strip | 5 plates |
| 15240 | Pierce™ Glutathione Coated Plates, White, 96-Well | 5 plates |
| 15340 | Pierce™ Glutathione Coated Plates, Black, 96-Well | 5 plates |
4. 镍和铜包被的板(Nickel and Copper coated plates):
镍和铜包被的板适合基于ELISA方法分析多组氨酸标记的融合蛋白的理想方法。在氨基或羧基末端含有一系列组氨酸残基的蛋白质对金属有很强的结合亲和力。铜的结合特异性不如镍,但具有较高的结合能力。
1)镍包被的板(Nickel coated plates):
Pierce镍包被板 - 这些Ni2+包被板非常适合基于ELISA方法分析His-tag的融合蛋白。 在氨基或羧基末端连续包含几个组氨酸残基的蛋白质对金属具有很强的结合亲和力。 含有His-tag融合蛋白的细菌裂解液可以直接添加到板中,而无需封闭。
| 货号 | 名称 | 规格 |
| 15142 | Pierce™ Nickel Coated Plates, Clear, 8-Well Strip | 5 plates |
| 15242 | Pierce™ Nickel Coated Plates, White, 96-Well | 5 plates |
| 15342 | Pierce™ Nickel Coated Plates, Black, 96-Well | 5 plates |
| 15442 | Pierce™ Nickel Coated Plates, Clear, 96-Well | 5 plates |
2)铜包被的板 (Copper Coated High Capacity Plates):
pierce铜包被高容量板 - 这些铜包被板是通过基于ELISA方法分析His-Tag融合蛋白的理想选择。在氨基或羧基末端连续包含多个组氨酸残基的蛋白质对金属(例如铜)具有很强的结合亲和力。
Pierce铜包被板具有很高的结合能力,使用独特工艺进行包被,从而增加了结合到板表面的His-Tag蛋白的量。尽管铜的结合特异性不如镍,但板的结合能力更高,对于需要提高灵敏度和更大动态范围的高通量筛选应用是理想的选择。
铜包被板有透明板、白色板和黑色板,可分别用于比色,化学发光或荧光检测方法。铜包被的板可与纯化的带有His标签的蛋白一起使用。需要特别注意的是:细胞裂解液包含一些非His-tag蛋白质,该类蛋白可能与铜结合,从而降低铜包被板的蛋白结合能力和信噪比。对于细胞裂解液,请使用pierce镍包被板。
| 货号 | 名称 | 规格 |
| 15143 | Pierce™ Copper Coated High Capacity Plates, Clear, 96-Well | 5 plates |
| 15146 | Pierce™ Copper Coated High Capacity Plates, Clear, 8-Well Strip | 5 plates |
| 15147 | Pierce™ Copper Coated High Capacity Plates, White, 96-Well | 5 plates |
| 15148 | Pierce™ Copper Coated High Capacity Plates, Black, 96-Well | 5 plates |
2. ELISA 抗体如何选择
在ELISA 实验过程中,抗原和抗体的质量是实验是否成功的关键因素。要求所用抗原纯度高,抗体效价高、亲和力强。
一抗:
单克隆或多克隆抗体都可以用作夹心ELISA系统中的捕获和检测抗体。单克隆抗体对单个表位具有固有的特异性,可以对抗原的微小差异进行精细检测和定量。多克隆抗体通常用作捕获抗体,然后,在夹心ELISA检测中将单克隆抗体用作检测抗体,以提供更高的特异性。除了使用传统的单克隆抗体外,重组单克隆抗体也可用于ELISA。例如,兔重组抗体衍生自产生抗体的细胞系,该细胞系经过改造可表达特定的抗体重链和轻链DNA序列。与衍生自杂交瘤的传统单克隆抗体相比,重组抗体不易受细胞系漂移或批次间差异的影响,因此可实现峰值抗原特异性。
选择抗体的另一个设计考虑因素是成本。生产多克隆抗体通常比单克隆抗体便宜(约5倍)。必须权衡通过将单克隆抗体同时用于捕获和检测抗体获得的特异性与生产两种单克隆抗体所需的成本和时间的权衡。另外,准备“自夹心” ELISA分析(使用相同的抗体进行捕获和检测)可能会限制最终ELISA的动态范围和灵敏度。
1)ABfinity重组兔单克隆抗体:
ABfinity抗体源自可生成兔单克隆抗体的细胞系,并通过分离及克隆特定抗体的重链和轻链 DNA 序列而产生。ABfinity 单克隆抗体产自克隆文库分离出的单一克隆。
优势:
a. 具有兔单抗的高特异性和高灵敏性 b. 重组生产,批次间稳定一致 c. 只结合单个表位的单克隆抗体 d. 无动物源生产 e. 储存 DNA 库而非细胞库
注意事项: a. 无多表位结合
2)ABfinity重组兔寡克隆抗体:
优势:
a. 具有兔抗体的高特异性和高灵敏性 b. 重组生产,批次间稳定一致 c. 通过DNA文库表达生产的多表位结合位点 d. 无动物源 e. 储存DNA库而非细胞库
注意事项:
a. 无单表位结合 b. 由于多表位结合,可能观察到更多交叉反应性
3)噬菌体展示重组单克隆抗体:
噬菌体展示重组单克隆抗体,经由编码抗体可变区的 DNA 序列跟编码包膜蛋白的噬菌体基因融合后表达。因此,噬菌体包膜在其表面表达抗体融合蛋白。
优势:
a. 重组生产带来的批次间一致性 b. 单表位结合 c. 无动物源生产 d. 储存 DNA库而非细胞库
注意事项:
a. 噬菌体展示抗体相比动物源抗体可能亲和性更低 b. 噬菌体展示抗体缺少糖基化 c. 无多表位结合
4)单克隆抗体:
单克隆抗体源自杂交瘤细胞。它们的生产包括接种动物(最常用的是小鼠),分离其脾细胞,然后同亲本细胞融合。所得杂交瘤细胞经过表征后筛选最好的克隆用于抗体生产。
优势:
a. 单克隆杂交瘤细胞系生产,批次间稳定一致 b. 单表位结合
注意事项:
a. 随着时间推移单克隆抗体会呈现细胞漂移 b. 无多表位结合 c. 需要考虑单克隆抗体的同型特异性
5)兔单克隆抗体:
兔单克隆抗体源自杂交瘤细胞。它们的生产包括接种兔,分离其脾细胞,然后同亲本细胞融合。所得杂交瘤细胞经过表征后筛选最好的克隆用于抗体生产。
优势:
a. 具有兔全部天然抗体库带来的高特异性 b. 单表位结合 c. 兔中的单个同种型
注意事项:
a. 随着时间推移,兔杂交瘤比小鼠杂交瘤更快呈现细胞漂移(cell-line drift) b. 无多表位结合
6)多克隆抗体:
多克隆抗体源自动物免疫产生的 B 细胞。抗体从动物血清纯化,包括结合抗原上不同表位的多种抗体。
优势:
a. 多表位结合 b. 使用全部天然抗体库带来的高特异性
注意事项:
a. 每次动物免疫会造成批次间差异性 b. 无单表位结合 c. 由于多表位结合,更有可能观察到交叉反应性
二抗:
二抗是指用于靶向结合一抗的抗体。在多种免疫印迹、ELISA以及免疫荧光等免疫实验中,二抗经常和一抗结合使用以检测目标蛋白。很多二抗都带有标记物,例如Alexa Fluor荧光染料或辣根过氧化物酶(HRP),从而使二抗的信号可以被检测到。
实验中也可以使用带有标记物的一抗,但是二抗有很多优点。无论是使用哪种一抗进行检测,使用二抗可便于更换不同的标记物。例如,同样的一抗可以与HRP标记二抗一起用于免疫印迹,也可以与另一种Alexa Fluor 488荧光标记二抗一起用于免疫荧光实验。
另外,二抗结合在抗原位置的标记染料比直标一抗要多,从而增强检测信号。使用二抗可以避免对一抗进行复杂且昂贵的化学标记(偶联),而且偶联反应(具有氨基酸特异性)可能干扰一抗对抗原的识别。
选择最佳的二抗要考虑以下因素:
a. 种属来源和种属反应性 b. 特异性反应 c. 纯化方法 d. 交叉吸附 e. 多重检测能力 f. 抗体类型和亚型 g. 完整抗体还是抗体片段 h. 标记物 i. 生物素结合蛋白
抗体对:
由于抗体的选择对实验的影响比较大,所以我们建议选择配对的抗体进行ELISA实验,配对抗体指的是可以同时结合在一个抗原分子上的两个抗体。配对抗体,一般应用于夹心ELISA实验。配对抗体的制备与筛选过程复杂,即使两个抗体针对的是不同的抗原决定簇,也并不意味着这两个抗体分子一定可以同时与抗原分子结合。当一个抗体与抗原结合后,有可能会导致其他结合位点(抗原决定簇)构型的改变,从而导致其他的抗体无法正常结合到抗原上。位阻效应的存在,也可能使两个结合位点距离较近的抗体无法同时结合在抗原上。因此想要得到可以同时结合在抗原分子上的配对抗体,在制备出抗体后,还需要对得到的抗体进行筛选。因此我们建议选择制备与筛选好的,已经过测试的匹配抗体对产品进行ELISA实验,确保实验的准确性。
ELISA抗体对产品
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货号 |
名称 |
规格 |
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人 |
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|
10X96 T |
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10X96 T |
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10X96 T |
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10X96 T |
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10X96 T |
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|
10X96 T |
||
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10X96 T |
||
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10X96 T |
||
|
10X96 T |
||
|
10X96 T |
||
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10X96 T |
||
|
10X96 T |
||
|
10X96 T |
||
|
10X96 T |
||
|
10X96 T |
||
|
BMS231-3MST |
IL-13 Human Matched Antibody Pair |
10X96 T |
|
10X96 T |
||
|
BMS201MST |
ICAM-1 (Soluble) Human Matched Antibody Pair |
10X96 T |
|
BMS2013MST |
IL-12/IL-23 p40 Human Matched Antibody Pair |
10X96 T |
|
10X96 T |
||
|
10X96 T |
||
|
10X96 T |
||
|
BMS233MST |
IFN omega Human Matched Antibody Pair |
10X96 T |
|
BMS239MST |
CD40L (Soluble) Human Matched Antibody Pair |
10X96 T |
|
10X96 T |
||
|
大鼠 |
||
|
10X96 T |
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|
BMS628MST |
IL-4 Rat Matched Antibody Pair |
10X96 T |
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小鼠 |
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10X96 T |
||
|
10X96 T |
||
|
猪 |
||
|
CSC0103 |
IL-10 Porcine Matched Antibody Pair |
10X96 T |
|
CSC1243 |
IL-2 Porcine Matched Antibody Pair |
10X96 T |
|
10X96 T |
||
|
10X96 T |
||
|
CSC4033 |
IFN gamma Porcine Matched Antibody Pair |
10X96 T |
|
猴 |
||
|
BMS648MST |
ICAM-1(Soluble) Monkey Matched Antibody Pair |
10X96 T |
|
BMS654MST |
TNF alpha Monkey Matched Antibody Pair |
10X96 T |
|
鸡 |
||
|
10X96 T |
||
3. ELISA 底物的选择
所有ELISA系统的最后阶段都是信号的检测步骤。这涉及到酶底物的引入, 抗体偶联的酶将酶底物转化为可检测的产物。ELISA 中所用的酶要求纯度高、催化反应的转化率高、专一性强、性质稳定、来源丰富、价格不贵、制备成的酶标抗体或抗原性质稳定,继续保留着它的活性部分和催化能力。 如果已经正确构建和开发了ELISA,则添加底物时产生的信号强度将与捕获在平板中抗原和被检测试剂结合的抗原量成正比。 酶联抗体(尤其是涉及辣根过氧化物酶(HRP)的抗体)在发色、化学荧光和化学发光成像中可使用的底物种类繁多,因此在ELISA的检测和记录方法中提供了最大的灵活性。 下图说明了与Luminol有关的化学反应,Luminol是一种具有化学发光性的试剂。

ELISA发色底物虽然不如荧光或化学发光底物灵敏,但可以直接观察并进行动力学研究。此外,许多实验室通常使用标准的吸光光度计检测发色ELISA底物。ELISA荧光底物并不常见,并且需要使用激光器才能产生正确的激发光束,从而使荧光染料产生信号。使用化学发光底物进行ELISA的缺点是信号强度的变化可能比其它底物大。对于需要读取多个板的测定时,如果信号在读板之前开始衰减,则可能会出现检测误差问题。因此,重要的是要确保使用底物对检测进行优化,以避免将样品中的信号衰减误解为低抗原丰度。
ELISA发色底物
一种碱性磷酸酶(AP)底物和三种辣根过氧化物酶(HRP)发色底物:
- PNPP(对硝基苯磷酸二钠盐):
是广泛用于ELISA应用中检测碱性磷酸酶(AP)的底物。 PNPP产生黄色的水溶性反应产物,该产物吸收405 nm的光。 PNPP既可以是结晶粉末,5毫克片剂,也可以是即用型制剂。
- ABTS(2,2'-叠氮双[3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸]-二铵盐):
用于检测HRP,产生水溶性绿色反应产物。 绿色产物具有两个主要的吸收峰,即410 nm和650 nm。 对于HRP检测,ABTS不如OPD和TMB底物敏感,其 显色缓慢(大约20分钟),如果由于较高的灵敏度而使得OPD或TMB底物导致背景不可接受时,使用ABTS非常用利。 ABTS既有片剂形式,也有即用的制剂形式。
- OPD(邻苯二胺二盐酸盐):
用于检测HRP,并产生水溶性橙色反应产物。 反应产物的最大吸光度为492 nm。 OPD有粉末或片剂形式,可通过将其溶于稳定的过氧化物底物缓冲液或过氧化氢缓冲液中轻松制备。
- TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺):
用于检测HRP,产生可溶性蓝色底物。 反应产物的最大吸光度为370 nm和652 nm。当加入硫酸或磷酸,颜色变为黄色,在450 nm处具有最大吸光度。 TMB非常敏感,如果使用过多的蛋白质或抗体,则可能会产生明显的背景信号。 与其他HRP底材相比,TMB的氧化速度更快,从而显色更快。
AP:碱性磷酸酶; HRP:辣根过氧化物酶。
|
反应酶 |
产品 (底物) |
货号 |
总检测数 |
吸光度/颜色 |
检测限 |
一抗/二抗稀释 (从 1 mg/ml母液) |
|
AP |
1-Step PNPP |
37621 |
1,000 孔 |
405 nm Yellow |
10 ng/well [100 ng/ml] |
一抗 1: 500 二抗 1: 5,000 - 1:20,000 |
|
AP |
PNPP, Phosphatase Substrate Kit |
37620 |
5,250 孔 |
405 nm Yellow |
410 ng/well [100 ng/ml] |
一抗 1: 500 二抗 1: 5,000 - 1:20,000 |
|
AP |
PNPP, 105 tablets |
34047 |
250 孔 |
405nm Yellow |
10 ng/well [100 ng/ml] |
一抗 1: 500 二抗 1: 5,000 - 1:20,000 |
|
AP |
PNPP, 25 g |
34045 |
250,000 孔 |
405nm Yellow |
10 ng/well [100 ng/ml] |
一抗 1: 500 二抗1: 5,000 - 1:20,000 |
|
HRP |
1-Step ABTS |
37615 |
2,000 孔 |
410 nm (650nm) Green |
250 pg/well [2.5 ng/ml] |
一抗 1: 1,000 二抗 1: 5,000 - 1:50,000 |
|
HRP |
OPD, 25 g |
34005 |
5,000 孔 |
490nm(450nm) Green (Orange) |
7pg/well [70 pg/ml] |
一抗 1: 1,000 二抗 1: 5,000 - 1:50,000 |
|
HRP |
OPD, 50 tablets |
34006 |
5,000 孔 |
490nm(450nm) Green (Orange) |
7pg/well [70 pg/ml] |
一抗 1: 1,000 二抗 1: 5,000 - 1:50,000 |
|
HRP |
1-Step Slow TMB |
34024 |
2,500 孔 |
450nm(652nm) Yellow (Blue) |
8pg/well [80 pg/ml] |
一抗 1: 1,000 二抗 1: 5,000 - 1:50,000 |
|
HRP |
1-Step Turbo TMB |
34022 |
2,500 孔 |
450nm(652nm) Yellow (Blue) |
7pg/well [70 pg/ml] |
一抗 1: 1,000 二抗 1: 5,000 - 1:50,000 |
|
HRP |
TMB Substrate Kit |
34021 |
4,000 孔 |
450nm(652nm) Yellow (Blue) |
6pg/well [60 pg/ml] |
一抗 1: 1,000 二抗 1: 5,000 - 1:50,000 |
|
HRP |
1-Step Ultra TMB |
34028 34029 |
2,500 孔 |
450nm(652nm) Yellow (Blue) |
2pg/well [20 pg/ml] |
一抗 1: 1,000 二抗 1: 5,000 - 1:50,000 |
化学发光ELISA底物
我们提供了几种化学发光底物,用于ELISA:
- CSPD和CDP-Star底物是化学发光的碱性磷酸酶底物,可立即用于硝酸纤维素膜上的蛋白质或核酸印迹。 这些底物也可用于基于溶液的测定中。 它们分别以5或25 mM的水溶液缓冲液供应。 查看有关使用Sapphire-II或Emerald-II发光增强剂提高灵敏度的详细信息。
- 带有RapidGlow Enhancer的DynaLight底物是一种即用型化学发光底物配方,经过优化可在基于溶液的测定中获得更快的结果。 具有RapidGlow增强剂配方的DynaLight底物包括1,2-二氧杂环丁烷化学发光底物和聚合物增强剂,该聚合物增强剂能够通过碱性磷酸酶标记进行超灵敏的免疫分析检测。
- SuperSignal ELISA Pico化学发光底物在各种目标蛋白量上均具有出色的性能,并且易于优化,比entry-level 比色底物具有更高的灵敏度。 快速信号生成,根据HRP浓度,具有5-30分钟的信号稳定性。
- SuperSignal ELISA Femto超高灵敏度底物是用于ELISA应用的最敏感底物之一。 经过适当优化后,其下限将比常用的比色底物低1到10个数量级。 但是,如果不进行适当的优化,则很容易使蛋白质和酶系统不堪重负,从而导致本底过高,甚至可能产生阴性结果。
|
酶结合物 |
产品(底物) |
货号 |
最大吸光度颜色 |
检测限 |
一抗 / 二抗 稀释 (从 1 mg/mL 母液) |
|
AP |
CDP-Star Substrate |
||||
|
AP |
CSPD Substrate |
||||
|
AP |
DynaLight Substrate with RapidGlow Enhancer |
4475406 (100 mL) 4475410 (1 L) |
1 pg/ml |
||
|
HRP |
SuperSignal ELISA Pico |
37070 (1000 wells) 37069 (2500 wells) |
425nm Blue/Green |
~500 fg/well (5 pg/mL) |
一抗1:1000 二抗1:10000- 1:50000 |
|
HRP |
SuperSignal ELISA Femto |
37075 (1000 wells) 37074 (2500 wells) |
425nm Blue/Green |
~170 fg/well (1.7 pg/mL) |
一抗1:1000 二抗1:50000 - 1:100000 |
ELISA荧光底物
我们提供两种化学荧光底物,用于用辣根过氧化物酶(HRP)ELISA:
- QuantaBlu荧光底物具有较大的线性检测范围,并且具有低端线性度,可检测HRP。 稳定的荧光反应产物的Emax / Amax为420 nm / 325 nm,可以进行停止,不停止和动力学分析。 相对于更敏感的化学发光底物有一个优势。(QuantaBlu Fluorogenic Substrate has a larger linear detection range with low-end linearity for detection of HRP. The stable fluorescent reaction product has an Emax/Amax of 420 nm/325 nm allowing stopped, non-stopped and kinetic assays to be performed; an advantage over the more sensitive chemiluminescent substrates.)
- QuantaRed增强型化学荧光底物是可用于HRP检测的最灵敏的荧光ELISA底物。 当反应停止时,荧光反应产物(试卤灵)稳定4小时,Emax / Amax为585nm / 570nm。 红移的试卤灵反应产物允许在波长下进行检测,从而减少生物样品中可能发生的自发荧光干扰。(QuantaRed Enhanced Chemifluorescent Substrate is the most sensitive fluorescent ELISA substrate available for HRP detection. The fluorescent reaction product (resorufin) is stable for 4 hours with an Emax/Amax of 585 nm/570 nm when the reaction is stopped. The red-shifted resorufin reaction product permits detection at a wavelength less interference from autofluorescence that can occur in biological samples.)
- Amplex Red Reagent是H2O2的高灵敏度和稳定探针,是我们最好的过氧化物酶荧光底物之一。 由于H2O2是在许多不同的酶促反应中产生的,因此Amplex Red试剂使研究人员能够检测许多不同酶的活性(Amplex Red检测试剂盒)。(Amplex Red Reagent a highly sensitive and stable probe for H2O2, is one of our best fluorogenic substrate for peroxidase. Because H2O2 is produced in many different enzymatic reactions, the Amplex Red reagent allows researchers to detect the activity of many different enzymes (Amplex Red Assay Kits).)
- Amplex UltraRed试剂改进了我们独特的Amplex Red试剂的性能,在过氧化物酶或过氧化物酶偶联的酶检测中,基于每摩尔,提供了更亮的荧光和更高的灵敏度。(Amplex UltraRed Reagent improves upon the performance of our unique Amplex Red reagent, offering brighter fluorescence and enhanced sensitivity on a per-mole basis in peroxidase or peroxidase-coupled enzyme assays.
|
反应酶 |
产品(底物) |
货号(总含量) |
发射/激发最大吸光度 |
检测限 |
一抗/二抗(抗体稀释液) |
|
HRP |
QuantaBlu Fluorogenic Substrate |
15169 (2700 wells) |
420 nm / 325 nm |
~500 fg/well |
一抗 1:500 |
|
HRP |
QuantaBlu Kinetic Fluorogenic Substrate |
15162 (2700 wells) |
420 nm / 325 nm |
~500 fg/well |
一抗 1:500 二抗 1:5K to 1:20K |
|
HRP |
QuantaRed Enhanced Chemifluorescent Substrate |
15159 (1000 wells) |
585 nm / 570 nm |
~400 fg/well |
一抗1:1K |
|
HRP |
Amplex Red Reagent |
A12222 (200 assays) |
571 nm / 585 nm |
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|
HRP |
Amplex UltraRed Reagent |
A36006 (3400 rxns) |
490–550 nm/580–590 nm |
4. ELISA 缓冲液
一次 ELISA 实验需要各种缓冲液,包括包被、封闭、洗涤、稀释和检测缓冲液。虽然这些缓冲液的基本配方可单独提供,但大多数可以在市场上买到,以便简化实验、加速及标准化每种 ELISA 的流程。开发这些缓冲液是为了增强特异性、可重复性和灵敏度,并最大程度降低成本。
1. ELISA包被缓冲液
ELISA实验中需要包被缓冲液来使抗原或抗体稳定,以促进它被动吸附到微孔板表面,而不改变表位。氨基酸与微孔板孔之间的疏水相互作用会导致抗原或抗体吸附和固化,而且会受多种因素的影响,包括温度、pH、浓度和时间等。我们提供商品化的包被缓冲液以满足您的实验需求。
货号 |
名称 |
规格 |
|
1 each |
||
|
100 mL |
||
|
100 mL |
||
|
28382 |
BupH Carbonate-Bicarbonate Buffer Packs |
40 packs |
2. ELISA封闭液
ELISA微板孔的结合能力通常高于每个孔中的蛋白质包被量。必须封闭剩余的表面积,以防止抗体或其它蛋白质在后续步骤中吸附到板上。封闭液是不相关蛋白质、蛋白质混合物或其它化合物的溶液,它们被动地吸附在板的所有剩余结合面上。封闭液能有效减少背景信号和提高信噪比,从而提高检测的灵敏度。理想的封闭液将与所有非特异性相互作用的潜在位点结合,完全消除背景,而不会改变或模糊抗体结合的表位。使用不足量的封闭剂会导致背景过大,并降低信噪比。使用过量浓度的封闭剂可能会掩盖抗体-抗原的相互作用或抑制酶,从而再次降低信噪比。没有任何一种封闭剂在各种情况下都是理想的,而经验测试对于真正优化封闭步骤至关重要。
选择适合您实验的封闭液
|
product |
ELISA |
WB |
IHC |
Nucleic Acid detextion |
|
SuperBlock Blocking Buffers |
√ |
√ |
√ |
|
|
StartingBlock Blocking Buffers |
√ |
√ |
√ |
|
|
Blocker Casein Blocking Buffers |
√ |
√ |
√ |
√ |
|
Blocker BSA Blocking Buffers |
√ |
√ |
√ |
√ |
|
Blocker BLOTTO Blocking Buffers |
√ |
√ |
√ |
|
|
SEA BLOCK Blocking Buffer |
√ |
√ |
||
|
Pierce Protein-Free |
√ |
√ |
封闭液产品
|
货号 |
名称 |
规格 |
|
37530 |
Blocker BLOTTO in TBS |
1 L |
|
37520 |
Blocker BSA (10X) in TBS |
125 mL |
|
37525 |
Blocker BSA (10X) in PBS |
200 mL |
|
37582 |
Blocker Casein in PBS |
100 mL |
|
37528 |
1 L |
|
|
37583 |
Blocker Casein in TBS |
100 mL |
|
37532 |
1 L |
|
|
37584 |
Pierce Protein-Free (PBS) Blocking Buffer |
100 mL |
|
37572 |
1 L |
|
|
37573 |
Pierce Protein-Free T20 (PBS) Blocking Buffer |
1 L |
|
37570 |
Pierce Protein-Free (TBS) Blocking Buffer |
1 L |
|
37571 |
Pierce Protein-Free T20 (TBS) Blocking Buffer |
1 L |
|
37538 |
StartingBlock (PBS) Blocking Buffer |
1 L |
|
37578 |
100 mL |
|
|
37539 |
StartingBlock T20 (PBS) Blocking Buffer |
1 L |
|
37542 |
StartingBlock (TBS) Blocking Buffer |
1 L |
|
37579 |
100 mL |
|
|
37543 |
StartingBlock T20 (TBS) Blocking Buffer |
1 L |
|
37580 |
SuperBlock (PBS) Blocking Buffer |
100 mL |
|
37515 |
1 L |
|
|
37518 |
5 L |
|
|
37516 |
SuperBlock T20 (PBS) Blocking Buffer |
1 L |
|
37517 |
SuperBlock (PBS) Blocking Buffer - Blotting |
1 L |
|
37581 |
SuperBlock (TBS) Blocking Buffer |
100 mL |
|
37535 |
1 L |
|
|
37545 |
SuperBlock (TBS) Blocking Buffer Dry Blend |
5 packs |
|
37536 |
SuperBlock T20 (TBS) Blocking Buffer |
1 L |
|
37537 |
SuperBlock (TBS) Blocking Buffer - Blotting |
1 L |
|
T2015 |
I-Block Protein-Based Blocking Reagent |
30 g |
3. ELISA洗涤液
ELISA每个实验步骤之间都需要进行彻底的洗涤,以去除未结合的试剂并降低背景,从而提高信噪比。洗涤不足会导致高背景,而过度洗涤可能会由于从孔中洗脱抗体和/或抗原而导致灵敏度降低。在没有任何添加剂的缓冲液(如Tris缓冲盐水(TBS)或磷酸盐缓冲盐水(PBS))中进行洗涤。通常,将诸如0.05%Tween-20之类的去污剂添加到洗涤液中,以帮助去除非特异性结合的物质。
货号 |
名称 |
规格 |
|
500 mL |
||
|
500 mL |
||
|
100 mL |
||
|
WB02 |
Wash Buffer (25X) |
1 L |
|
28360 |
Pierce 20X TBS Tween 20 Buffer |
500 mL |
|
28379 |
BupH Tris Buffered Saline Packs |
10 packs |
|
28376 |
BupH Tris Buffered Saline Packs |
40 packs |
|
28352 |
Pierce 20X PBS Tween 20 Buffer |
500 mL |
|
8 mL |
||
|
10 Packets |
4. ELISA稀释液
5X ELISA / ELISPOT稀释液是磷酸盐缓冲液,补充了胎牛血清作为动物血清蛋白的来源。该缓冲液用于封闭ELISA板的非特异性结合,稀释重组标准品和测试样品,并稀释第二检测试剂(即检测抗体-生物素和AV-HRP)的工作稀释液,该稀释剂溶液还包含防腐剂。
货号 |
名称 |
规格 |
|
200 mL |
||
|
100 mL |
5. ELISA终止液
终止液是一种阻止(生化试剂)化学反应继续进行的一种试剂,ELISA酶联免疫实验结果出来后由于显色剂和残留酶标液作用,反应还在继续进行中,会影响实验结果数值,就需要终止液终止反应。终止液一般用强酸或者强碱做主要配方。
货号 |
名称 |
规格 |
|
250 mL |
如果您以上试剂都需要,那么我们提供方便快捷的ELISA缓冲液试剂盒,试剂盒中包含使用ELISA抗体对或运行ELISA所需的所有基本缓冲液,足够运行10个ELISA板。
货号 |
名称 |
规格 |
|
10 plates |
5. ELISA 常见问题解答
1. 变异系数(CV)较大
|
原因 |
解决方案 |
|
孔中有气泡 |
确保读取酶标板前不存在气泡 |
|
孔洗涤不均/未彻底洗涤 |
检查洗板机的所有管口是否畅通。按建议洗涤孔 |
|
试剂不完全混合 |
确保所有试剂已充分混合 |
|
移液量不一致 |
使用校准好的移液器和正确技术已确保准确移液 |
|
边缘效应 |
确保酶标板和所有试剂都处于室温 |
|
样品制备或保存条件不一致 |
确保始终如一的样品制备和最优的样品保存条件(例如尽可能减少冻融循环次数) |
2. 标准曲线较差
|
原因 |
解决方案 |
|
标准溶液配制不当 |
确认是否正确进行稀释 |
|
标准品复溶不当 |
打开前短暂离心样品瓶;检查复溶后是否有未溶解的物质 |
|
标准品已降解 |
按推荐方式保存并处理标准品 |
|
曲线与标度不适合 |
尝试使用不同标度绘制曲线,列如对数-对数、5参数逻辑曲线拟合 |
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移液出错 |
使用校准好的移液器和正确的移液方法 |
3. 阴性对照出现阳性结果
|
原因 |
解决方案 |
|
试剂/样品污染 |
试剂和样品可能被污染,或者由于孔之间的溅洒交叉污染。使用新鲜试剂,小心操作移液器 |
|
夹心ELISA-检测抗体与包被抗体反应 |
确定使用的是正确的包被抗体和检测抗体,他们之间不会互相反应 |
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酶标板洗板不彻底 |
用洗液充满板孔确保每孔被充分洗涤,洗板前确保所有的剩余抗体溶液被倒净 |
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抗体量过多导致非特异性结合 |
根据推荐用量使用抗体。尽量使用较少的抗体。 |
4. 无信号
|
原因 |
解决方案 |
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孵育时间过短 |
将样品在4℃下孵育过夜或遵循制造商指南 |
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靶标含量低于测定的检测线 |
减少稀释倍数或浓缩样品 |
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不相容的样品类型 |
在待测样品中检测不到或检测到很低的靶蛋白。建议实验中带一个已知的阳性对照 |
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微量滴定板吸附作用阻碍表位识别 |
为了增强直接或间接ELISA对多肽的检测,在多肽包被到微量滴定板之前,将肽偶联到大的载体蛋白上 |
|
测定缓冲液相容性 |
确保测定缓冲液与所关注的靶标相容(例如,保留酶活性、保留蛋白质相互作用) |
|
检测试剂不足 |
按照制造商指南,提高检测试剂的浓度或量。 |
|
样品制备不正确 |
确保正确进行样品制备/稀释。样品可能与微量滴定板形式不相容 |
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抗体不足 |
尝试抗体的不同浓度/稀释度 |
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孵育温度过低 |
确保在正常温度下进行孵育。在进行孵育前,所有的试剂包括板均应置于室温下或遵循制造商的建议 |
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波长不正确 |
核实波长并重新读取酶标板 |
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微量滴定板清洗过度 |
检查并确保自动清洗系统的压力正确。如果进行手工清洗,则轻轻移取清洗缓冲液 |
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孔干透 |
检测一旦开始后,不要让孔变干。对于所有孵育,用密封膜或胶带覆盖微量滴定板 |
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酶反应显色慢 |
使用前配制底物溶液。确保母液没有失效且没有被污染。延长孵育时间 |
5. 背景偏高
|
原因 |
解决方案 |
|
孔洗涤不充分 |
按照实验方案建议洗涤孔 |
|
洗涤液受污染 |
制备新鲜的缓冲液 |
|
检测试剂过多 |
确保试剂正确稀释或降低检测试剂的推荐浓度 |
|
封闭液无效(例如检测试剂结合封闭剂;孔未完全封闭) |
尝试不同的封闭剂和/或将封闭剂添加到洗涤液 |
|
孵育/洗涤液的盐浓度 |
增加盐浓度可能会降低非特异性和/或减弱脱靶相互作用 |
|
添加终止液后等候时间太长才读取酶标板 |
添加终止液后立即读取酶标板 |
|
抗体出现非特异性结合 |
使用合适的封闭液,比如BSA或5-10%的正常血清—如果使用直接偶联的检测抗体,则封闭液种类与一抗相同;如果使用偶联二抗,则种类与二抗相同。确保孔已经过预处理以防止非特异性附着。 |
|
高抗体浓度 |
尝试不同的稀释度以优化结果 |
|
底物孵育在灯光下进行 |
底物孵育应在黑暗中进行或遵循制造商建议 |
|
添加底物后会在孔中形成沉淀 |
增大样品的稀释倍数或降低底物浓度 |
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酶标板不干净 |
清洗酶标板底部 |
6. 灵敏度偏低
|
原因 |
解决方案 |
|
ELISA试剂盒保存不当 |
按推荐方式保存所有试剂。请注意所有试剂的保存要求可能不相同 |
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靶标不足 |
浓缩样品或降低样品稀释度 |
|
检测试剂失活 |
确保报告酶/荧光团具有语气活性 |
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酶标仪设置不正确 |
确保酶标仪设置为在荧光检测中读取正确的吸光度波长或激光/发射波长 |
|
测定形式不够灵敏 |
换成更为灵敏的检测系统(例如,把比色检测换成化学发光/荧光检测)。换为更为灵敏的测定类型(例如把直接ELISA换成夹心ELISA)。延长孵育时间或增加温度。 |
|
靶标吸附到微量滴定板的效果不佳 |
将靶标共价结合到微量滴定板 |
|
底物不足 |
添更多的底物 |
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不相容的样品类型 |
在待测样品中检测不到或检测到很低的靶蛋白。建议实验中带一个已知的阳性对照 |
|
干扰缓冲液或样品成分 |
检查任何干扰化学物质的试剂。例如,抗体中的叠氮化钠会抑制HRP酶,用作血浆采集抗凝剂的EDTA会抑制酶促反应 |
|
混合或替换不同试剂盒中的试剂 |
请勿混合来自不同试剂盒的组分 |
6. 免疫球蛋白检测鉴定和同型分析 ELISA 试剂盒
特异性免疫球蛋白ELISA试剂盒和同型分析ELISA试剂盒,为定性和定量分析杂交瘤细胞生长期和生长后抗体类型、亚型以及同型提供了一种快速、灵敏且简便的方法。一次可检测多个样本,用于检测免疫应答。
小鼠和大鼠同型分析ELISA试剂盒:
Ig同型鉴定预包被ELISA(即用)试剂盒 |
Ig同型鉴定未包被ELISA试剂盒 |
|
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类型 |
预包被ELISA试剂盒(即用ELISA类型) |
未包被ELISA试剂盒 |
|
优点 |
仅需添加样品,捕获和检测抗体已在板上冻干。 |
抗体没有预先包被在孔板上,因此您可以修改检测方法和方案。 |
|
特点 |
每板检测10-12个样品 简易:只需1个洗涤步骤 快速:2小时孵育 规格:2 x 96 T 样本用量少:10 µL |
每板检测10-12个样品 更便宜 孔型可定制 规格:10 x 96 T 样本用量:400 µL |
|
同型 |
IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA, IgM and kappa (κ)and lambda(λ) |
IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA, IgM and kappa(κ) and lambda(λ) |
|
小鼠同型鉴定试剂盒 |
88-50660-22(Ig Isotyping Mouse Instant ELISA Kit) |
88-50630-86(Ig Isotyping Mouse Uncoated ELISA Kit with Plates) 88-50630-88(Ig Isotyping Mouse Uncoated ELISA Kit) |
|
大鼠同型鉴定试剂盒 |
88-50650-22(Ig Isotyping Rat Instant ELISA Kit) |
88-50640-86(Ig Isotyping Rat Uncoated ELISA Kit with Plates) 88-50640-88(Ig Isotyping Rat Uncoated ELISA Kit) |
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![]() |
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建议Ig同型分析小鼠/大鼠ELISA试剂盒的板布局 |
对比传统ELISA的17个步骤,Instant 一步法ELISA减少到7个步骤, 减少了手动操作时间和误差,提高了工作效率和数据准确度。
|
人IgG ELISA检测试剂盒
|
货号 |
名称 |
规格 |
|
96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
96 Tests |
||
|
5X96 Tests |
||
|
96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
||
|
5X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
||
|
96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
||
|
5X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
||
|
96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
||
|
5X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
||
|
96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
||
|
5X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
人IgA,IgE,IgM ELISA检测试剂盒
货号 |
名称 |
规格 |
| 96 Tests | ||
| 10X96 Tests | ||
| 10X96 Tests | ||
| 20X96 Tests | ||
| 2X96 Tests | ||
| 10X96 Tests | ||
| 20X96 Tests | ||
| 96 Tests | ||
| 10X96 Tests | ||
| 10X96 Tests | ||
| 20X96 Tests | ||
| 2X96 Tests | ||
| 10X96 Tests | ||
| 20X96 Tests | ||
| 96 Tests | ||
| 10X96 Tests | ||
| 10X96 Tests | ||
| 20X96 Tests | ||
| IgM Human Uncoated ELISA Kit with Plates | 2X96 Tests | |
| 10X96 Tests | ||
| 20X96 Tests |
小鼠IgG ELISA检测试剂盒
货号 |
名称 |
规格 |
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
96 Tests |
||
|
5X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
小鼠IgA,IgE,IgM ELISA检测试剂盒
货号 |
名称 |
规格 |
|
96 Tests |
||
|
5 X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
96 Tests |
||
|
5 X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
大鼠IgG ELISA检测试剂盒
|
货号 |
名称 |
规格 |
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
大鼠IgA,IgE,IgM ELISA检测试剂盒
|
货号 |
名称 |
规格 |
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
||
|
2X96 Tests |
||
|
10X96 Tests |
||
|
20X96 Tests |
7. ProQuantum高灵敏度免疫检测试剂盒
有没有更快的方法来检测蛋白 ?
样品有限时,有足够的量来检测我感兴趣的蛋白吗 ?
我正在尝试检测微量的蛋白,我该怎么做 ?
ProQuantum高灵敏度免疫检测试剂盒是由ELISA技术结合PCR技术延伸出更为灵敏的ProQuantum高灵敏度免疫检测技术,其利用qPCR仪器为研究人员提供了易于运行的高性能检测,而无需购买其它特殊的专用仪器设备。该技术利用邻近连接测定(Proximity Ligation Assay,PLA)技术,为分析物提供了抗体-抗原结合特异性以及qPCR信号检测和扩增功能,实现了高灵敏度的蛋白定量检测。与传统方法相比,该技术可检测出更低水平的蛋白,并且样品使用量少,特别适用于检测珍贵或稀有样品以及含量较低的待测物分析物的检测。ProQuantum检测技术操作简捷,仅需一个抗体孵育步骤,然后将检测板放入任何qPCR仪器进行信号检测即可,无需中间洗涤步骤。
ProQuantum高灵敏度免疫检测试剂盒的优点:
• 高灵敏度 — 相比传统方法,以更高的灵敏度检测低水平表达的蛋白
• 动态线性范围广 — ≥5对数单位,尽可能减少样品稀释步骤,确保样品浓度在该范围内
• 样品消耗量小— 仅需使用2–5 µL样品
• 工作流程快速、简单 — 从样品到获取结果的时间通常为2小时,无需清洗步骤,只需1小时即可完成孵育
• 无需购买专用仪器 — 可在任何qPCR仪器上运行
• 直观的云分析软件 — 全面进行数据分析和统计分组对比
ProQuantum高灵敏度免疫检测试剂盒的原理:

A. 寡核苷酸引物偶联的抗体与分析物的结合
每个试剂盒中提供了两种抗体偶联物:3´末端寡核苷酸和5´末端寡核苷酸,每种偶联至靶标特异性抗体。当抗体对与蛋白的两个不同表位结合时,3´和5´引物会非常接近。
B:通过DNA连接酶连接两端引物,并通过Applied Biosystems TaqMan qPCR试剂盒进行扩增
只有当抗体对与蛋白结合时(A),对应的两端引物才能与互补的夹板引物结合,并随后通过DNA连接酶彼此连接(B)引物,连接后通过95°C热灭活使连接酶、抗体和其他蛋白质变性,仅留下100个碱基的链接引物,其浓度与第一阶段抗体-蛋白结合的水平相同。将该链接引物使用Taq Man检测试剂盒进行40个qPCR循环的信号扩增。
ProQuantum高灵敏度免疫检测试剂盒的组份:

注释:每个试剂盒都提供了实验所需的全部试剂,其数量足以进行96个测定反应。
ProQuantum高灵敏度免疫检测试剂盒的流程:

ProQuantum高灵敏度免疫检测试剂盒的工作流程简单,与ELISA等传统方法相比,孵育步骤更少,且无洗涤步骤,获得结果的时间更快。建议使用工作板进行所有准备步骤,包括混合抗体偶联物,未知样品的10倍稀释和蛋白标准品的系列稀释。
1. 分析物的结合:
(1)先在工作板将抗体引物,样品等需稀释的部分,先在工作板中完成稀释
(2)在检测板所有孔中加入5 µL抗体引物混合物
(3)然后在适当的孔中添加5 µL标准品或未知样品

2. 进行qPCR:
分析检测在两小时内完成,第一步是孵育使抗体与目标分析物结合1小时; 第二步是添加qPCR反应混合物,并将板放入qPCR仪器中进行连接和qPCR的读数。
向所有测定孔中添加40 μL qPCR反应混合物

注释:以上是在整个96孔板上一式三份运行5 μL样品体积的示例,体积可以缩小到2 μL样品。
ProQuantum高灵敏度免疫检测试剂盒的数据分析:
基于云软件的Invitrogen ProQuantum可用于支持您的数据分析,该软件可逐步帮助您进行检测设置,包括标准曲线的设置,板布局的设置和定制的实验说明。在完成检测后,只需将您的运行文件从qPCR仪器上下载到ProQuantum云应用并分析数据即可。
ProQuantum高灵敏度免疫检测试剂盒的验证:
注释:检出限(LOD)定义为高出背景2个标准偏差。对比多个人类细胞因子靶标的LOD的比较表明,ProQuantum平台的灵敏度比ELISA高约10-1,000倍。

注释:广泛动态线性范围(左图)。ProQuantum检测的标准曲线比ELISA标准曲线广,低浓度分辩率更好。人血请IL-8 ProQuantum与ELISA数据相关性。通过右图显示了两个平台之间的相关性数据。
注释:精准度。在同一次检测中不同10个孔检测相同且浓度已知的人IL-6样品(检测内精准度)。在三次不同的检测中测定10个浓度已知的人IL-6样品(检测间精密度)。

注释:稀释线性性和稀释平行。(A)对重组蛋白和在天然样品中发现的天然蛋白的检测显示出可比性的结果。对血清和上清液样品进行检测,并比对MCP-1 标准曲线以显示平行性。(B)线性表明标准曲线中观察到的信号与稀释化学计量原理匹配。血清和上清液样品显示,测得的结果与预期的结果在曲线的线性范围内相同。

注释:来自4个供体的正常人血清中可检测的蛋白质水平,使用各种ProQuantum免疫检测试剂进行 测量。所有样品均在其各自标准曲线的范围内显示出差异化的蛋白质水平。低于25pg/mL的蛋白浓度 值通常无法在ELISA平台获得明显差异的变化。
人ProQuantum高灵敏度免疫检测试剂盒:
货号 |
靶标 |
样品类型 |
灵敏度 |
测定范围 |
|
血清、血浆、上清液 |
<0.7 pg/mL |
0.76-1500000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.01 pg/mL |
0.0128-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.05 pg/mL |
0.064-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<1 mIU/mL |
1.28-20000 mIU/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.05 pg/mL |
0.064-25000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.005 pg/mL |
0.0064-500 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.05 pg/mL |
0.064-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.01 pg/mL |
0.0128-1000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.05 pg/mL |
0.064-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.01 pg/mL |
0.0128-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.1 pg/mL |
0.128-2000 ng/mL |
||
|
血清、血浆 |
<10 pg/mL |
192-3000000 pg/mL |
||
|
血清、血浆 |
<10 pg/mL |
192-3,000,000 pg/mL |
||
|
血清、血浆 |
<50 pg/mL |
0.08-1250 ng/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.05 pg/mL |
0.064-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.05 pg/mL |
0.064-10000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.01 pg/mL |
0.0128-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.01 pg/mL |
0.0128-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.01 pg/mL |
0.0128-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.01 pg/mL |
0.0128-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.05 pg/mL |
0.064-10000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.01 pg/mL |
0.0128-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.05 pg/mL |
0.064-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.05 pg/mL |
0.064-10000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.01 pg/mL |
0.0128-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.3 pg/mL |
0.32-25,000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.01 pg/mL |
0.0128-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.05 pg/mL |
0.064-10000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<15 pg/mL |
16-250,000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.01 pg/mL |
0.0128-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.05 pg/mL |
0.064-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<1.5 pg/mL |
1.6-25000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液、脑脊液 |
<10 pg/mL |
16-250,000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液、脑脊液 |
<0.05 pg/mL |
0.064-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.05 pg/mL |
0.064-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<240 pg/mL |
256-4000000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.01 pg/mL |
0.0128-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.05 pg/mL |
0.064-25000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.3 pg/mL |
0.32-25000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.3 pg/mL |
0.32-25000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.05 pg/mL |
0.064-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.3 pg/mL |
0.32-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.3 pg/mL |
0.32-25000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.3 pg/mL |
0.32-25000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.05 pg/mL |
0.064-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.05 pg/mL |
0.064-1000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.3 pg/mL |
0.32-25,000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.01 pg/mL |
0.0128-5000 pg/mL |
小鼠ProQuantum高灵敏度免疫检测试剂盒:
货号 |
名称 |
样品类型 |
灵敏度 |
测定范围 |
|
血清、血浆、上清液 |
<0.3 pg/mL |
0.32-25000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.3 pg/mL |
0.32-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.05 pg/mL |
0.064-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.3 pg/mL |
0.32-25000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.3 pg/mL |
0.32-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.3 pg/mL |
0.32-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.03 ng/mL |
0.032-2500 ng/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.06 pg/mL |
0.064-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.3 pg/mL |
0.32-5000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<1 pg/mL |
1.6-25000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.3 pg/mL |
0.32-25,000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
0.3 pg/mL |
0.32-25,000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<1 pg/mL |
1.6-25,000 pg/mL |
||
|
血清、血浆、上清液 |
<0.05 pg/mL |
0.064-5000 pg/mL |









