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文章目录

1.血液细胞分类

2.人造血干/祖细胞表型鉴定

3. CD4 T Cell Markers

4. CD8 T Cell Markers

5.B 细胞Markers

6. NKT/γδ Tcell markers

7. NK/ILC markers

8. DC 细胞Markers

9. 人粒细胞 markers

10. 人巨噬/单核细胞 markers

11. 人巨核细胞/血小板 markers

免疫分型

详细介绍了不同细胞典型标志物

1.血液细胞分类

人外周血白细胞 (A) 用CD45染色后，依据CD45的表达水平呈现分离的三个细胞群：粒细胞 (P1)、单核细胞(P2)和淋巴细胞(P3) 。 (B) FSC和 SSC散点图.

*检测CD45 表达和FSC、SSC分析能够帮助鉴别区分你所感兴趣的细胞群 Im, M. et al.

造血干细胞(hematopoietic stem cell, HSC)

细胞因子：SCF, TPO, Flt3 ligand

Markers:

人：CD34⁺, CD90^+,, Lin^-, CD38^-/low, CD45RA^-, CD49f⁺

小鼠: Lin^-, CD117⁺, Sca-1⁺

磁珠分选kit：

人：

小鼠：

培养基：

小分子抑制剂：StemRegenin 1 (SR1), UM171, GW9662

Lymphoid progenitor

细胞因子：SCF, IL-7

Markers:

人：

小鼠：

磁珠分选kit：

人：

小鼠：

培养基：

小分子抑制剂：

B cell lineage

SCF, IL-1β, IL-6， IL-7， IL-11， IL-12

Markers:

人：CD19⁺

小鼠: CD19⁺

磁珠分选kit：

人：

小鼠：

培养基：

Activated B细胞

TGF-β1, BAFF, IL-2, IL-4, IFN-γ, CD40L, anti-CD40, anti-CD180, anti IgM/IgD

Plasma cell

Markers:

人：CD138⁺

小鼠：CD138⁺

NK cell Lineage

SCF, IL-2, IL-12

Markers:

人: CD3^-, CD16⁺, CD56+

小鼠: CD3^-, CD49b⁺

磁珠分选kit：

人：

小鼠：

培养基：

Activated NK细胞

IL-2, IL-12, IL-15, IL-18

T cell Lineage:

细胞因子：SCF, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-7

Markers:

人：CD3⁺, CD56^-

小鼠: CD3⁺, CD49b^-

磁珠分选kit：

人：

小鼠：

培养基：

NK T细胞

IL-2, IL-7, IL-15, CD137L, anti CD3, anti CD28

Markers:

人：CD3⁺, CD56⁺

小鼠：

γδ T细胞

IL-2, IL-7, IL-15, CD137L, anti CD3, anti CD28

CD4 naïve T细胞

IL-2, IL-7, IL-15, CD137L, anti CD3, anti CD28

Markers: CD3, CD4, TCRα/β, CD62L, CD197 (CCR7), CD45RA, CD45RB

Human:

CD4⁺CD45RA⁺CD45RO^-, CD8-, CD14-, CD16^-, CD19^-, CD20^-, CD36^-, CD56^-, CD66b^-, CD123^-, TCRγ/δ^-, CD235a^-

Th1细胞

IL-2, IL-12, IL-18, IL-27, IFN-γ,anti CD3, anti CD28,anti IL-4

Markers: CD3, CD4, CD119 (IFN-γ Ra), CD183 (CXCR3), CD195 (CCR5), CD218a (IL-18Ra)， LT-βR， CD366 (Tim-3)

Th2细胞

IL-2, IL-4, IL-6,IL-31,IL-33,TSLP, IL-25,

anti CD3, anti CD28, anti IFN-γ, anti-IL-12/IL-23P40

Markers: CD3, CD4, CD119 (IFN-γ Ra), CD193 (CCR3), CD194 (CCR4), CDw198 (CCR8)， CRTH2， IL-33Ra, CD365 (Tim-1)

Th17细胞

IL-2, TGF-β1, IL-1β, IL-6, IL-21, IL-23,anti CD3, anti CD28, anti IL-2, anti L-4, anti IFNγ

Markers: CD3, CD4, TCRα/β, CD161, CD194 (CCR4), CD196 (CCR6)， IL-23R

Treg 细胞

IL-2,TGF-β1，anti CD3, anti CD28,

Markers:

CD3, CD4, CD25, FoxP3

Th9细胞

IL-2, TGF-β1，IL-4， anti IFN-γ，anti CD3, anti CD28,

Markers: CD3, CD4, TCR a/β

Tfh 细胞

IL-2, IL-6, IL-21, CXCL13, anti CD3, anti CD28

Markers: CD3, CD4, TCRα/β, CD84, CD126(IL-6Ra),CD150 (SLAM),CD154 (CD40L), CD185 (CXCR5), CD252 (OX40L), CD278 (ICOS), CD279 (PD1)

Th22 细胞

IL-2, IL-6, TNF-α, anti CD3, anti CD28

Markers: CD3, CD4, TCRα/β, CD194 (CCR4), CD196 (CCR6)， CCR10

CD8 naïve T细胞

IL-2, IL-7, IL-15, CD137L, anti CD3, anti CD28

Markers:

Human: CD8⁺CD45RA⁺CCR7⁺CD45RO^-CD57^-CD56^-, CD4^-, CD14^-, CD16^-, CD19^-, CD20^-, CD36^-, CD94^-, CD123^-, CD244^-, TCRγ/δ^-, CD235a^-

Treg细胞

IL-2, IL-7, IL-15, CD137L, anti CD3, anti CD28

Markers:

CD3, CD4, CD25, FoxP3

Megakaryocyte erythrocyte progenitor

细胞因子：SCF, IL-3， TPO

Markers:

人：

小鼠：

磁珠分选kit：

人：

小鼠：

培养基：

Megakaryocyte lineage（巨核细胞系）

IL-3, GM-CSF, TPO

Markers:

人：

小鼠：

磁珠分选kit：

人：

小鼠：

培养基：

platelets (Resting)

Markers:

人: CD42b⁺

小鼠: CD41⁺

platelets (activated)

Markers:

人: CD62p⁺

小鼠: CD62p⁺

Erythroid lineage

IL-3， GM-CSF, EPO

Markers:

人：

小鼠：

磁珠分选kit：

人：

小鼠：

培养基：

Red blood cells 红细胞

Markers:

人: CD235a⁺

小鼠：Ter119⁺

Common myeloid progenitor

IL-3, IL-6, G-CSF, GM-CSF, EPO

Markers:

人：

小鼠：

Monocytic lineage

IL-3, IL-4, M-CSF, GM-CSF

Markers:

人：CD14⁺, CD16±, CD64⁺

小鼠: CD11b^hi, CD115^hi, Gr-1^lo, Ly-6C^±

Osteoclast

M-CSF, RAK-L

Macrophage

Flt3 ligand, M-CSF, GM-CSF, IL-34

Markers:

人：CD11b⁺, CD68⁺, CD163⁺

小鼠：F4/80⁺, CD68⁺

Mature macrophage

TNF-α, IFN-γ, IL-4, IL-1β, IL-13

Dendritic cell（DC）

IFN-γ, IL-4, GM-CSF, Flt3 ligand, IL-34

Markers:

人：CD1c⁺, CD83⁺, CD141⁺, CD209⁺, MHC Ⅱ⁺

小鼠: CD11c⁺, MHC Ⅱ⁺

Mature dendritic cell

IL-1β, TNF-a， IL-6, IL-23, CD40L

Basophilic lineage

IL-3, IL-4, IL-10, TSLP

Markers:

人：2D7 antigen, CD117^-, CD123⁺, CD203c⁺ ,FcεRIα⁺

小鼠: CD200R3⁺, FcεRIα⁺

Eosinophilic lineage

IL-3, IL-4, GM-CSF, IL-5

Markers:

人：CD11b⁺, CD193⁺, EMR1⁺,Siglec-8, (CD16^-CD66b⁺CD45⁺)

小鼠：CD11b⁺, CD193⁺, F4/80⁺, Siglec-F⁺

Neutrophilic lineage

IL-3, IL-4, GM-CSF, G-CSF

Markers:

人：CD15⁺, CD16⁺, CD49d^-

小鼠：CD11b⁺， CD115^-, Ly-6B.2, Ly-6c^lo/neg, Ly6G⁺, Gr-1⁺

Mast cell lineage

IL-3, IL-4, SCF, TGF-ß1

Markers:

人：

小鼠：

图例：

Human CD4 Memory T cell: CD4⁺CD45RA^-CD45RO⁺,CD8^-, CD14^-, CD16^-, CD19^-, CD20^-, CD36^-, CD56^-, CD123^-, CD235a^-, γδ TCR^-

磁珠分选kit：

Human CD8 Memory T cell: CD8⁺CD45RA^-CD45RO⁺, CD4^-, CD14^-, CD11b^-, CD19^-, CD20^-, CD16^-, CD36^-, CD56^-, CD123^-, CD235a^-，γδ TCR^-

磁珠分选kit：

2.人造血干/祖细胞表型鉴定

选择正确的细胞是所有细胞实验开始的第一步。免疫磁珠细胞分选可以快速、简便地分离特定的细胞种类，但在有的实验中还需要进行更加精确的分选。作为一种革命性的实验工具，流式细胞术（Flow Cytometry）彻底改变了我们分选高特异性细胞群的能力。鉴定造血干细胞（HSCs）只能通过体内实验检测HSCs在移植后重建造血系统的能力。鉴定造血祖细胞（HPCs）的方法除了体内移植，还可以在体外检测其增殖和分化能力。多参数流式细胞术是一种非常重要的工具，它可以基于细胞表面标志物对这些造血干/祖细胞（HSPC）群体进行表型细分，并了解这种异质细胞群中不同亚群的多种功能。

人HSPCs中最被熟知的标志物是细胞表面糖蛋白CD34。该标志物可用于从骨髓和血液中鉴定和分离HSPCs，因为它在大多数（非全部）人HSPCs上高表达，但不表达于成熟血细胞。CD34⁺细胞不表达成熟血细胞具有的所谓的谱系（Lin）标志物，例如CD2、CD3、CD11b、CD11c、CD14、CD16、CD19、CD24、CD56、CD66b和CD235。而一些标志物在CD34⁺细胞群上的表达具有异质性，例如CD38、CD45RA、CD90和CD49f。如表1所示，可以通过这些标志物的不同组合来区分具有不同造血重建潜力的HSPC亚群。

表1. HSC和祖细胞亚群及标志物
细胞亚群	造血干细胞（HSC）		多能祖细胞（MPP）	多能淋系祖细胞（MLP）	普通髓系祖细胞（CMP)
标志物	Lin^-CD34⁺CD38^- CD45RA^-CD90⁺CD49f⁺		Lin^-CD34⁺CD38^- CD45RA^-CD90^-CD49f^-	Lin^-CD34⁺CD38^- CD45RA⁺CD90^-	Lin^-CD34⁺CD38⁺ CD45RA^-
细胞亚群	巨核细胞-红系祖细胞（MEP）	巨核细胞集落形成单位（CFU-Mk）	红系爆式形成单位（BFU-E）	粒细胞-巨噬细胞祖细胞（GMP）	普通淋系祖细胞（CLP）
标志物	Lin^-CD34⁺CD38^lo CD45RA^-	Lin^-CD34⁺CD38⁺ CD45RA^-	Lin^-CD34⁺CD38⁺CD45RA⁺	Lin^-CD34⁺CD38^- CD45RA^-	Lin^-CD34⁺CD38^-/lo CD45RA⁺CD90^-

当研究罕见的干/祖细胞群时，对免疫表型分型数据的精准度要求非常高。然而在骨髓和血液中HSPC的比例非常低。因此，为了节省时间和试剂，并提高分析的准确性，最好对已纯化的CD34⁺或谱系去除的细胞进行免疫表型分型。实验的设计和荧光抗体的选择很大程度上取决于实验目的和可用的流式细胞仪的配置。我们对经典论文和最新的文献进行数据汇编整理，以构建优化用于这些细胞鉴定的HSPC表型鉴定表。

用于HSPC表型分析的推荐染料及抗体

表2展示了用于HSPC亚群分析的推荐荧光标记抗体。该表在设计时选择用最亮的荧光染料PE检测表达量最低的细胞表面标记物CD90。PE适用于配有488nm蓝色激光和640nm红色激光以及四个或更多荧光通道的流式细胞仪，大多数实验室或流式平台皆配备有满足该要求的流式细胞仪。数据采集、门控策略和亚群鉴定的优化设置取决于仪器，需要根据实验者自身的经验进行调整。下面是用于HSPC免疫表型分析的推荐荧光染料，包括相应的抗体，已经过内部测试，以在常用流式细胞仪分析时提供最佳分辨率和灵活性。

细胞表面标志物	荧光染料	克隆抗体	产品号 #
CD34	FITC	581	11-0349-42
CD38	APC	HIT2	17-0389-42
CD90	PE	5E10	12-0909-42
CD45RA	APC-Cy7	HI100	N/A
CD49f	PE	GoH3	12-0495-82

图1. CD34⁺CD38^-CD45RA^-CD90⁺ HSC亚群的设门策略

3. CD4 T Cell Markers

Human

Pan markers	Th1	Th2	Th17	Tfh	Treg
CD2CD3CD4CD5CD6CD7CD25↑CD27CD28CD45RA(naïve：high,effector:low,menory:high)CD69↑CD127(IL7Rα)CD134（OX40）↑CD137(4-1BB)↑CD152(CTLA-4)↑CD154(CD40L)↑CD272(BTLA)↑CD279(PD-1)↑	分泌因子IFNγIL-2TNFαTNFβ(LTα)	分泌因子Amphiregulin IL-4IL-5IL-13	分泌因子GM-CSFIL-17AIL-17AFIL-17FIL-21IL-22	分泌因子IL-21	分泌因子IL-10TGFβ
	细胞表面CD94CD119(IFNγR1)CD183(CXCR3)○CD186(CXCR6)CD191(CCR1) CD195(CCR5)CD212(IL-12Rβ1) CD218a（IL-18Rα）CD254(RANKL)CD366(TIM3)	细胞表面CD184(CXCR4)CD194(CCR4)CD198(CCR8)CD294(CRTH2)○CD365(TIM1)IL-25R(IL-17RB)IL-33R(ST2)	细胞表面CD121aCD161CD194(CCR4)CD196(CCR6)○CD360(IL-21R)CD212(IL-12Rβ1)IL-33R	细胞表面CD183(CXCR3)●CD185(CXCR5)○CD278(ICOS)○CD279(PD-1)○	细胞表面CD25○CD39CD73CD101CD121aCD121bCD137(4-1BB)CD152(CTLA-4)CD357(GITR/AITR)GARP↑LAP↑TIGIT●
	胞内/转录因子SAT1SAT4T-bet○	胞内/转录因子BATFGATA-3○IRF4STST6	胞内/转录因子AHRBATFc-MafIkBζIRF4RORαRORγt○STAT3	胞内/转录因子BATFBcl-6c-MafIRF4STAT3	胞内/转录因子c-RelEosFoxp3○HeliosSTAT5

↑=Upregulated ↓=Downregulated ○=Key marker ●=Subset

人全血10色免疫表型分析

鉴别多种T细胞亚群和髓细胞

抗体组合

CD56 Mouse anti Human mAb， PE	CD14 Mouse anti Human mAb，APC-Cy7
CD33 Mouse anti Human mAb，FITC	CD19 Mouse anti Human mAb， Pacific Green
CD11c Mouse anti Human mAb，PE	CD3 Mouse anti Human mAb， Alexa Fluor700
CD4 Mouse anti Human mAb， Percp-Cy5．5	HLA-DR Mouse anti Human mAb，PE-Cy7
CD25 Mouse anti Human mAb，APC	CD62L Mouse anti Human mAb， Pacific Blue

染料	Excitation(nm)	Emission(nm)
Pacific Blue	405	440/50
Pacific Green	405	512/25
Pacific Orange	405	603/48
FITC	488	530/30
PerCP-Cy5.5	488	695/40
PE	561	685/16
PE-Cy7	561	780/60
APC	637	670/14
Alexa Fluor 700	637	720/30
APC-Cy7	637	780/60

人全血13色免疫表型分析

B细胞、T细胞亚群、NK细胞和髓系细胞免疫表型分析

抗体组合

CD45 Mouse anti Human mAb，Pacific Orange	CD3 Mouse anti Human mAb， Alexa Fluor 700
CD8 Mouse anti Human mAb，Pacific Blue	HLA-DR Mouse anti Human mAb，PE-Cy7
CD4 Mouse anti Human mAb， PerCP-Cy 5．5	CD62L Mouse anti Human mAb， APC-Alexa Fluor 750
CD25 Mouse anti Human mAb，APC	CD33 Mouse anti Human mAb，PE-Cy 5
CD19 Mouse anti Human mAb， Pacific Green	CD45RA Mouse anti Human mAb，FITC
CD14 Mouse anti Human mAb，Qdot 705	CD56 Mouse anti Human mAb， PE

Mouse

Pan markers

Naive CD4⁺ T

Th1

Th2

Th17

Tfh

Treg

CD3

CD4

CD5

CD7

CD25↑

CD27

CD28

CD44↑

CD62L(naïve：high,effector:low,menory:high)

CD69↑

CD127(IL7Rα)

CD134（OX40）↑

CD137(4-1BB)↑

CD152(CTLA-4)↑

CD154(CD40L)↑

CD272(BTLA)↑

CD278(ICOS)↑

CD279(PD-1)↑

CD45⁺

CD3⁺

CD4⁺

CD62L⁺

CD25^-

CD44 ^low/-

分泌因子

IFNγ

IL-2

TNFα

TNFβ(LTα)

分泌因子

Amphiregulin

IL-4

IL-5

IL-13

IL-10

分泌因子

GM-CSF

IL-17A

IL-17AF

IL-17F

IL-21

IL-22

分泌因子

IL-21

分泌因子

IL-10

TGFβ

细胞表面

CD94

CD119(IFNγR1)

CD183(CXCR3)○

CD186(CXCR6)

CD191(CCR1)

CD195(CCR5)

CD212(IL-12Rβ1)

CD218a（IL-18Rα）

CD254(RANKL)

CD366(TIM3)

细胞表面

CD184(CXCR4)

CD194(CCR4)

CD198(CCR8)

CD294(CRTH2)

CD365(TIM1)

IL-25R(IL-17RB)

IL-33R(ST2)○

细胞表面

CD194(CCR4)

CD196(CCR6)○

CD121a

CD360(IL-21R)

CD212(IL-12Rβ1)

IL-33R

细胞表面

CD185(CXCR5)○

CD278(ICOS)○

CD279(PD-1)○

细胞表面

CD25

CD39

CD73

CD101

CD121a

CD121b

CD137(4-1BB)

CD152(CTLA-4)

CD304(Neuropilin-1)○

CD357(GITR)

GARP↑

LAP↑

TIGIT

胞内/转录因子

SAT1

SAT4

T-bet○

胞内/转录因子

BATF

GATA-3○

IRF4

STST6

胞内/转录因子

AHR

BATF

c-Maf

IkBζ

IRF4

RORα

RORγt○

STAT3

胞内/转录因子

BATF

Bcl-6

c-Maf

IRF4

STAT3

胞内/转录因子

c-Rel

Eos

Foxp3○

Helios

STAT5

↑=Upregulated ↓=Downregulated ○=Key marker ●=Subset

小鼠脾细胞10色免疫表型分析

抗体组合

CD45R (B220) Rat Anti-Mouse mAb, Pacific Orange™	CD8α Rat Anti-Mouse mAb, Alexa Fluor™ 700
CD3ε Hamster Anti-Mouse mAb, PerCP-Cy5.5	CD11c Hamster Anti-Mouse mAb, PE-Cy7
CD25 Rat Anti-Mouse mAb, APC	I-A/I-E (MHCII) Rat Anti-Mouse mAb, Pacific Blue™
CD45.2 Mouse Anti-Mouse mAb, APC-Cy7	CD11b Rat Anti-Mouse mAb, FITC
CD4 Rat Anti-Mouse mAb, Pacific Green™

4. CD8 T Cell Markers

Human

Pan markers

Central memory

Effector memory

Effector

Naïve

CD2

CD3

CD5

CD7

CD8

CD25↑

CD27

CD28

分泌因子

IFNγ^int

IL-2^int

TNFα^int

分泌因子

Granzyme B

IFNγ^high

IL-2^low

Perforin

TNFα^high

分泌因子

CCL3(MIP-1α)

CCL4(MIP-1β)

CCL5(RANTES)

Granzyme A

Granzyme k

Granzyme B

IFNγ

IL-2

Perforin

TNFα

细胞表面

CD27

CD45RA

CD62L

CD127(IL7Rα)

CD197（CCR7)

细胞表面

CCR7^low

CD27

CD28

CD45RO

CD62L○

CD62L^low

CD127(IL7Rα)^high

CD197（CCR7）^low○

细胞表面

CD44

CD45RO○

CD62L^low

CD127(IL7Rα)^high

CD197（CCR7）^low

KLRG1○

KRG1^high

细胞表面

CD25↑

CD69↑

CD30

CD122↑○

CD137(4-1BB)

CD134(OX40)

CD223(LAG-3)

CD272(BTLA)

CD278(ICOS)

CD279(PD-1)

CD366(TIM3)

KLRG1○

胞内/转录因子

Eomes

T-bet^int

胞内/转录因子

Eomes

T-bet^int

胞内/转录因子

T-bet^int

↑=Upregulated ↓=Downregulated ○=Key marker ●=Subset

人全血10色免疫表型分析

鉴别多种T细胞亚群和髓细胞

抗体组合

CD56 Mouse anti Human mAb， PE	CD14 Mouse anti Human mAb，APC-Cy7
CD33 Mouse anti Human mAb，FITC	CD19 Mouse anti Human mAb， Pacific Green
CD11c Mouse anti Human mAb，PE	CD3 Mouse anti Human mAb， Alexa Fluor700
CD4 Mouse anti Human mAb， Percp-Cy5．5	HLA-DR Mouse anti Human mAb，PE-Cy7
CD25 Mouse anti Human mAb，APC	CD62L Mouse anti Human mAb， Pacific Blue

染料	Excitation(nm)	Emission(nm)
Pacific Blue	405	440/50
Pacific Green	405	512/25
Picific Orange	405	603/48
FITC	488	530/30
Percp-Cy5．5	488	695/40
PE	561	685/16
PE-Cy7	561	780/60
APC	637	670/14
Alexa Fluor700	637	720/30
APC-Cy7	637	780/60

人全血13色免疫表型分析

B细胞、T细胞亚群、NK细胞和髓系细胞免疫表型分析

图片2.png

抗体组合

CD45 Mouse anti Human mAb，Pacific Orange	CD3 Mouse anti Human mAb， Alexa Fluor 700
CD8 Mouse anti Human mAb，Pacific Blue	HLA-DR Mouse anti Human mAb，PE-Cy7
CD4 Mouse anti Human mAb， PerCP-Cy 5．5	CD62L Mouse anti Human mAb， APC-Alexa Fluor 750
CD25 Mouse anti Human mAb，APC	CD33 Mouse anti Human mAb，PE-Cy 5
CD19 Mouse anti Human mAb， Pacific Green	CD45RA Mouse anti Human mAb，FITC
CD14 Mouse anti Human mAb，Qdot 705	CD56 Mouse anti Human mAb， PE

Mouse

Pan markers

Central memory

Effector memory

Effector

Naïve

CD3

CD5

CD8

CD27

CD28

分泌因子

IFNγ^low

IL-4^low

分泌因子

Granzyme B

IFNγ

IL-2

Perforin

TNFα

分泌因子

CCL3(MIP-1α)

CCL4(MIP-1β)

CCL5(RANTES)

Granzyme A

Granzyme B

IFNγ

IL-2

Perforin

TNFα

细胞表面

CD62L

CD127(IL7Rα)

CD197（CCR7)

CD183(CXCR3)

细胞表面

CD44

CD62L○

CD127(IL-7Rα)

CD197（CCR7）^high○

细胞表面

CD44

CD57

KLRG1○

细胞表面

CD25↑

CD69↑

CD30

CD44

CD122↑

CD137(4-1BB)

CD134(OX40)

CD223(LAG-3)

CD272(BTLA)

CD278(ICOS)

CD279(PD-1)

CD366(TIM3)

KLRG1●

胞内/转录因子

bcl-6

Eomes

T-bet^int

胞内/转录因子

Eomes^int

T-bet^int

BLIMP1

胞内/转录因子

Eomes^int

T-bet^int

BLIMP1

↑=Upregulated ↓=Downregulated ○=Key marker ●=Subset

小鼠脾细胞10色免疫表型分析

抗体组合

CD45R (B220) Rat Anti-Mouse mAb, Pacific Orange™	CD8α Rat Anti-Mouse mAb, Alexa Fluor™ 700
CD3ε Hamster Anti-Mouse mAb, PerCP-Cy5.5	CD11c Hamster Anti-Mouse mAb, PE-Cy7
CD25 Rat Anti-Mouse mAb, APC	I-A/I-E (MHCII) Rat Anti-Mouse mAb, Pacific Blue™
CD45.2 Mouse Anti-Mouse mAb, APC-Cy7	CD11b Rat Anti-Mouse mAb, FITC
CD4 Rat Anti-Mouse mAb, Pacific Green™

5.B 细胞Markers

Human

Pan markers	Follicular	Marginal zone	Germinal center	Plasma cell	Memory
CD19 CD20 CD22 CD70↑○ CD79α/β Igk/λ	细胞表面 CD20 CD21 CD22 CD27 CD23↑○ CD24 CD40↑ CD45R(B220) CD69↑ CD80↑ CD81 CD86↑ CD137(4-1BB)↑ CD275(B7-H2) CD279(PD-1) CD360(IL-2 receptor) HLA-DR IgD^high○ IgM^low/int	细胞表面 CD1d CD9 CD21○ CD45R(B220) CD81 CD103 CD180(RP105) CD268(BAFF receptor)○ CD307d(FcRL 4) IgM	分泌因子 IgA IgE IgG	分泌因子 IgA IgE IgG	细胞表面 CD27● IgG TLR1,2,6,7,10
		胞内/转录因子 EBF1 Notch2 Pax5	细胞表面 CD45R(B220) CD81	细胞表面 CD9 CD19^low/neg CD20^l^ow/neg CD27 CD31 CD38 CD81 CD138○ CD184(CXCR4）	胞内/转录因子 CBF1 Pax5 Spi-B
	胞内/转录因子 Bcl-6 EBF1 FoxO1 Ikaros Pax5	胞内/转录因子 EBF1 Notch2 Pax5	胞内/转录因子 AID Bach2 Bcl-6○ IRF8 NF-kappaB Pax5	胞内/转录因子 BLIMP1 IRF4 XBP-1	胞内/转录因子 CBF1 Pax5 Spi-B

↑=Upregulated ↓=Downregulated ○=Key marker ●=Subset

人全血13色免疫表型分析

B细胞、T细胞亚群、NK细胞和髓系细胞免疫表型分析

图片2.png

抗体组合

CD45 Mouse anti Human mAb，Pacific Orange	CD3 Mouse anti Human mAb， Alexa Fluor 700
CD8 Mouse anti Human mAb，Pacific Blue	HLA-DR Mouse anti Human mAb，PE-Cy7
CD4 Mouse anti Human mAb， PerCP-Cy 5．5	CD62L Mouse anti Human mAb， APC-Alexa Fluor 750
CD25 Mouse anti Human mAb，APC	CD33 Mouse anti Human mAb，PE-Cy 5
CD19 Mouse anti Human mAb， Pacific Green	CD45RA Mouse anti Human mAb，FITC
CD14 Mouse anti Human mAb，Qdot 705	CD56 Mouse anti Human mAb， PE

染料	Excitation(nm)	Emission（nm）
Pacific Blue	405	440/50
Pacific Green	405	512/25
Pacific Orange	405	603/48
FITC	488	530/30
PerCP-Cy5.5	488	695/40
PE	561	685/16
PE-Cy7	561	780/60
APC	637	670/14
Alexa Fluor 700	637	720/30
APC-Cy7	637	780/60

Mouse

Pan markers

Follicular

Marginal

zone

Germinal

center

Plasma cell

Memory

CD20

CD21/CD35^low/neg

CD22

CD23

CD24(HSA)^low

CD25↑

CD36↑

CD40↑

CD69↑

CD80↑

CD81

CD86↑

CD180(RP105)

CD252(OX40 ligand)↑

IgD^high

IgM^low/int

细胞表面

CD20

CD21/CD35^low/neg

CD22

CD23○

CD24(HSA)^low

CD25↑

CD36↑

CD40↑

CD69↑

CD80↑

CD81

CD86↑

CD180(RP105)

CD252(OX40 ligand)↑

IgD^high

IgM^low/int

细胞表面

CD1b

CD5^low●

CD9

CD21/CD35^high○

CD23^low/neg

CD24(HSA)^low

CD36

CD81

CD180(RP105)

CD363(S1PR1)

FcRL3

IgD^low/neg

IgM^high○

细胞表面

CD19

CD81

CD95

GL7○

IgG

细胞表面

CD9

CD16/32

CD19^low

CD81

CD138○

IgG

细胞表面

CD38○

CD45R(B220)^low

CD267（TACI）

IgG

胞内/转录因子

Bcl-6
EBF1
FoxO1
Ikaros
Pax5

胞内/转录因子

EBF1

Notch2

胞内/转录因子

AID

Bach2

Bcl-6

IRF8

NF-kB

Pax5

胞内/转录因子

BLIMP1

IRF4

XBP-1

胞内/转录因子

CBF1

Spi-B

↑=Upregulated ↓=Downregulated ○=Key marker ●=Subset

6. NKT/γδ Tcell markers

Human

Pan markers

γδ Tcell

NKT

CD3

分泌因子

GM-CSF●

Granzyme B

IFNγ●

IL-4●

IL-5●

IL-17A●

Perforin

TNFα●

分泌因子

IL-4↑●

IL-10↑●

IL-13↑●

IFNγ↑●

TNFα↑●

细胞表面

CD5●

CD16●

CD27●

CD28●

CD45RA●

CD56●

CD57●

CD62L●

CD69

CD70↑●

CD107a●

CD314(NKG2D)

TCR γδ●

TCR Vδ1●

TCR Vδ2●

TCR Vδ3●

细胞表面

CD4●

CD8●

CD16

CD56

CD69

CD160

TCR Vα24○

Intracellular/transcription factor

PLZF

Id2

↑=Upregulated ↓=Downregulated ○=Key marker ●=Subset

人全血13色免疫表型分析

B细胞、T细胞亚群、NK细胞和髓系细胞免疫表型分析

图片2.png

抗体组合

CD45 Mouse anti Human mAb，Pacific Orange	CD3 Mouse anti Human mAb， Alexa Fluor 700
CD8 Mouse anti Human mAb，Pacific Blue	HLA-DR Mouse anti Human mAb，PE-Cy7
CD4 Mouse anti Human mAb， PerCP-Cy 5．5	CD62L Mouse anti Human mAb， APC-Alexa Fluor 750
CD25 Mouse anti Human mAb，APC	CD33 Mouse anti Human mAb，PE-Cy 5
CD19 Mouse anti Human mAb， Pacific Green	CD45RA Mouse anti Human mAb，FITC
CD14 Mouse anti Human mAb，Qdot 705	CD56 Mouse anti Human mAb， PE

染料	Excitation(nm)	Emission（nm）
Pacific Blue	405	440/50
Pacific Green	405	512/25
Pacific Orange	405	603/48
FITC	488	530/30
PerCP-Cy5.5	488	695/40
PE	561	685/16
PE-Cy7	561	780/60
APC	637	670/14
Alexa Fluor 700	637	720/30
APC-Cy7	637	780/60

Mouse

Pan markers	γδ Tcell	NKT
CD3	分泌因子 Granzyme B IFNγ IL-4● IL-5● IL-17A● Perforin TNFα●	分泌因子 IL-4↑● IL-10↑● IL-13↑● IL-17↑● IL-22↑● IL-21↑● IFNγ↑● TNFα↑●
	细胞表面 CD25↑● CD27● CD28● CD44● CD45R(B220)↑● CD45RB● CD62L● CD69↑● CD71↑● CD103 CD122● CD127(IL-7Rα)● CD150● CD196(CCR6)● TCR γδ● IL-1R1● NK1.1(on C57BL/6)● TCR Vδ1● TCR Vδ4● TCR Vδ5● TCR Vδ6● TCR Vδ7●	细胞表面 CD4● CD8● CD44↑ CD49b● CD94● CD160 CD183(CXCR3) CD184(CXCR4) CD186(CXCR6) CD314(NKG2D)● DX5 Ly-49● NK1.1(on C57BL/6) TCR Vα14○
	胞内/转录因子 Eomes RORγt● T-bet●	胞内/转录因子 PLZF Egr2 HEB Hobit

↑=Upregulated ↓=Downregulated ○=Key marker ●=Subset

7. NK/ILC markers

Human

ILC1

ILC2

ILC3

LTi

分泌因子

Granulysin

Granzyme A

Granzyme B

Granzyme K

Granzyme M

IFNγ

IL-10

Perforin

TNFα

分泌因子

CCL3(MIP-1α)

IFNγ

分泌因子

IL-4

IL-5

IL-9

IL-13

Amphiregulin

分泌因子

IL-17A●

IL-17AF●

IL-17F●

IL-22●

分泌因子

IL-17

IL-22

LTβ

TNFβ（LTα）

细胞表面

CD11b

CD16

CD56○

CD69↑

CD94

CD122

CD161

CD244○

CD226

CD314(NKG2D)

CD335(NKp46)

CD336(NKp44)●

CD337(NKp30)

CD158 family

KLRG1●

TIGIT●

细胞表面

CD56

CD103

CD183(CXCR3)

CD335(NKp46)

CD336(NKp44)

CD337(NKp30)

Lin^neg

细胞表面

CD56

CD103

CD183(CXCR3)

CD186(CXCR6)

CD199(CCR9)

CD278(ICOS)

CD294(CRTH2)

IL-25R(IL-17RB)

IL-33R(ST2)

Lin^neg

TSLP receptor

细胞表面

CD56●

CD117○

CD127(IL-7Rα)○

CD335(NKp46)●

CD336(NKp44)●

CD337(NKp30)●

IL-23R

Lin^neg

细胞表面

CD7

CD25

CD117○

CD127(IL-7Rα)○

CD161

CD196(CCR6)

CD252(OX40L)

IL-23R

MHCⅡ

胞内/转录因子

E4BP4

Eomes

GATA-3

Id2

Runx1

T-bet

TOX

胞内/转录因子

Id2

T-bet

胞内/转录因子

Arginase-1

GATA-3

Gfi1

Id2

RPRα

TCF1

胞内/转录因子

AHR

Id2

RORγt

T-bet●

TCF1●

胞内/转录因子

AHR

Id2

RORγt

Runx1

TOX

↑=Upregulated ↓=Downregulated ○=Key marker ●=Subset

人全血13色免疫表型分析

B细胞、T细胞亚群、NK细胞和髓系细胞免疫表型分析

抗体组合

CD45 Mouse anti Human mAb，Pacific Orange	CD3 Mouse anti Human mAb， Alexa Fluor 700
CD8 Mouse anti Human mAb，Pacific Blue	HLA-DR Mouse anti Human mAb，PE-Cy7
CD4 Mouse anti Human mAb， PerCP-Cy 5．5	CD62L Mouse anti Human mAb， APC-Alexa Fluor 750
CD25 Mouse anti Human mAb，APC	CD33 Mouse anti Human mAb，PE-Cy 5
CD19 Mouse anti Human mAb， Pacific Green	CD45RA Mouse anti Human mAb，FITC
CD14 Mouse anti Human mAb，Qdot 705	CD56 Mouse anti Human mAb， PE

染料	Excitation(nm)	Emission（nm）
Pacific Blue	405	440/50
Pacific Green	405	512/25
Pacific Orange	405	603/48
FITC	488	530/30
PerCP-Cy5.5	488	695/40
PE	561	685/16
PE-Cy7	561	780/60
APC	637	670/14
Alexa Fluor 700	637	720/30
Alexa Fluor 700	637	780/60

Mouse

NK

ILC1

ILC2

ILC3

LTi

分泌因子

Granzyme A

Granzyme B

Granzyme K

IFNγ

IL-10

Perforin

TNFα

分泌因子

CCL3(MIP-1α)

IFNγ

分泌因子

IL-4

IL-5

IL-9

IL-13

Amphiregulin

分泌因子

IL-17A●

IL-17AF●

IL-17F●

IL-22●

分泌因子

IL-17

LTβ

TNFβ（LTα）

细胞表面

CD11b

CD16

CD25

CD49b(DX5)○

CD94

CD122

CD161c（NK1.1）

CD226

CD314(NKG2D)

CD335(NKp46)○

Ly-49 family

TIGIT

细胞表面

CD103

CD183(CXCR3)

CD335(NKp46)○

Lin^neg

^{Ly-6A/E(Sca-1）}

细胞表面

CD25

CD117

CD127(IL-7Rα)

CD184(CXCR4)

CD186(CXCR6)

CD199(CCR9)

CD278(ICOS)

CD294(CRTH2)○

IL-25R(IL-17RB)○

Ly-6A/E(Sca-1）

IL-33R(ST2)

TSLP receptor

细胞表面

CD117

CD127(IL-7Rα)○

CD196(CCR6)○

CD335(NKp46)●

IL-23R

Lin^neg

细胞表面

CD4

CD25

CD117

CD127(IL-7Rα)○

CD185(CXCR5)

CD186(CXCR6)

CD196(CCR6)

IL-23R

MHCⅡ

胞内/转录因子

E4BP4

Eomes

GATA-3

Id2

Runx1

T-bet

TOX

胞内/转录因子

Id2

T-bet

胞内/转录因子

Arginase-1

GATA-3

Gfi1

Id2

RPRα○

TCF1

胞内/转录因子

AHR

Id2

RORγt

T-bet●

TCF1●

胞内/转录因子

AHR

Id2

RORγt○

Runx1

TOX

NK1.1 (CD161)在C57BL/6, FVB/N和NZB小鼠NK细胞和T细胞亚群中表达，但是小鼠AKR, BALB/c, CBA/J, C3H, DBA/1, DBA/2, NOD, SJL和129不表达。

NKp46 (CD335)表达在小鼠BALB/c, SJL, CBA/CA, C57BI/6, NOD, DBA/2和B6.129 NK细胞上。

8. DC 细胞Markers

Human

Pan markers

Conventional dendritic cell

Plasmacytoid dendritic cell

CD11b

CD13

CD33

CD80↑

CD83

CD86↑

MHCⅡ↑

分泌因子

IDO●

IL-1β

IL-6

IL-8

IL-12

IL-15

IL-23

分泌因子

IFNα

IFNβ

细胞表面

CD1b●

CD1c(BDCA-1)●

CD11c○

CD14●↓

CD40↑

CD49d●

CD141(BDCA-3)●

CD172a（SIRPa）

CD197(CCR7)●

CD205(DEC-205)

CD207(Langerin)●

CD206

CD273(B7-DC)

CD282(TLR2)

CD284(TLR4)

CD369(Dectin-1)

CD307(CLEC9A)

细胞表面

CD85g（ILT7）

CD123○

CD283(TLR3)

CD303(BDCA-2)○

CD304(BDCA-4)○

CD307(CLEC9A)

胞内/转录因子

CD135

CD289(TLR9)●

Fit3

胞内/转录因子

CD287(TLR7)

CD289(TLR9)

E2-2

IRF8

↑=Upregulated ↓=Downregulated ○=Key marker ●=Subset

mouse

Pan markers

Conventional Dendritic Cell

Plasmacytoid Dendritic Cell

CD11c

CD80↑

CD86↑

MHCⅡ↑

分泌因子(Secreted):

IDO●

IL-1β

IL-6

IL-8

IL-12

IL-15

IL-23

分泌因子(Secreted):

IFNα

IFNβ

细胞表面

CD4●

CD8●

CD11b^low●

CD40↑

CD83

CD197(CCR7)

CD205(DEC-205)○

CD207(Langerin)●

CD209(DC-SIGN)

CD273(B7-DC)

CD369(Dectin-1)

CD307(CLEC9A)

DCIR2

细胞表面

CD45R（B220）

CD317(BST2,PDCA-1)○

Siglec-H○

胞内/转录因子

CD135（Fit3）

CD183（TLR3）

CD289(TLR9)

胞内/转录因子

CD287(TLR7)

CD289(TLR9)

E2-2

IRF8

↑=Upregulated ↓=Downregulated ○=Key marker ●=Subset

9. 人粒细胞 markers

Human

Pan markers

Mast

Neutrophil

Basophil

Eosinophil

CD11b

CD13

CD15

CD32

CD33

分泌因子

Cathepsins

Histamine

TNFα

IL-4

TGFβ

NGF

分泌因子

Elastase

Lactoferrin

IL-6

IL-12

TNFα

IL-1 α/β

分泌因子

Histamine

IL-4

IL-13

CCL3(MIP-1α)

分泌因子

MBPs

EDN

EPX

细胞表面

CD9

CD15

CD24

CD35

CD43

CD64

CD116

CD117(c-kit)○

CD123

CD125

CD126

FcεR1○

IL-33R（ST-2)

细胞表面

CD10

CD15

CD17

CD24

CD35

CD43

CD66a

CD66b○

CD66c

CD66d

CD89

CD93

CD112

CD114

CD116

CD157

CD177

CD181(CXCR1)

CD282(TLR2)

CD284(TLR4)

CD286(TLR6)

Calprotectin（S100A8/A9）

细胞表面

Basophil Marker

CD9

CD11a

CD13

CD16

CD25

CD33

CD38

CD43

CD88

CD123○

CD125

CD154

CD192

CD203c

CD218(IL-18R)

CD282(TLR2)

CD284(TLR4)

CD286(TLR6)

FcεR1○

细胞表面

CD9

CD15

CD24

CD35

CD43

CD64

CD116

CD123

CD125○

CD126

CD193(CCR3)○

CD244

FcεR1○

胞内/转录因子

CD281(TCR1)

CD289(TCR9)

胞内/转录因子

C/EBPα

CD281(TCR1)

CD289(TCR9)

GATA2

↑=Upregulated ↓=Downregulated ○=Key marker ●=Subset

10. 人巨噬/单核细胞 markers

Human

Pan

markers

macrophage

Monocyte

Tissue associated macrophage

CD11b

CD15

CD33

CD40

CD63

CD68（mature）

CD80↑

CD85

CD86↑

CD105↑

CD115

CD169

CD195(CCR5)

CD282(TLR2)

CD284(TLR4)

CD354（Trem-1）

CXCL10

CXCL11

CXCL9

GPNMB

Mature macrophage marker

MIP-2α(CXCL2)

分泌因子

IDO

IL-10

TGFβ

分泌因子

IFNγ

IL-1α

IL-1β

IL-6

IL-12

IL-23

TNFα

细胞表面

CD14○

CD33

CD172a(SIRPα)

细胞表面

Axl

CD192(CCR2)

CD14

CD68

CD115

CD163

CD206

CD369(Dectin-1)

HLA-DR

CD273(PD-L2)

细胞表面

CD115

CD204

CD163

CD206(MMR)

CD209(DC-SIGN)

FcεR1

VSIG4

细胞表面

CD16

CD16/CD32

CD32

CD64

CD68

CD80

CD86

CD369(Dectin-1)

Mer（MerTK）

MHCⅡ

胞内/转录因子

NOS2

胞内/转录因子

IRF4

STST6

胞内/转录因子

IRF5

STST1

↑=Upregulated ↓=Downregulated ○=Key marker ●=Subset

11. 人巨核细胞/血小板 markers

返回免疫分型目录

Human

Platelet

Megakaryocyte

细胞表面

CD9

CD23

CD31

CD36

CD41

CD42a○

CD42b○

CD42c

CD42d

CD49f

CD51

CD60a

CD61

CD84

CD92

CD107a↑

CD107b↓

CD110

CD147

CD151

CD173

CD226

GARP

LAP

细胞表面

CD41○

CD42a

CD42b○

CD42c

CD42d

CD49f

CD51

CD61

CD110

CD112

CD123

↑=Upregulated ↓=Downregulated ○=Key marker ●=Subset

文章目录

免疫分型

1.血液细胞分类

造血干细胞(hematopoietic stem cell, HSC)

细胞因子：SCF, TPO, Flt3 ligand

Markers:

人：CD34+, CD90+,, Lin-, CD38-/low, CD45RA-, CD49f+

小鼠: Lin-, CD117+, Sca-1+

磁珠分选kit：

人：

小鼠：

培养基：

小分子抑制剂：StemRegenin 1 (SR1), UM171, GW9662

Lymphoid progenitor

细胞因子：SCF, IL-7

Markers:

人：

小鼠：

磁珠分选kit：

人：

小鼠：

培养基：

小分子抑制剂：

B cell lineage

SCF, IL-1β, IL-6， IL-7， IL-11， IL-12

Markers:

人：CD19+

小鼠: CD19+

磁珠分选kit：

人：

小鼠：

培养基：

Activated B细胞

TGF-β1, BAFF, IL-2, IL-4, IFN-γ, CD40L, anti-CD40, anti-CD180, anti IgM/IgD

Plasma cell

Markers:

人：CD138+

小鼠：CD138+

NK cell Lineage

SCF, IL-2, IL-12

Markers:

人: CD3-, CD16+, CD56+

小鼠: CD3-, CD49b+

磁珠分选kit：

人：

小鼠：

培养基：

Activated NK细胞

IL-2, IL-12, IL-15, IL-18

T cell Lineage:

细胞因子：SCF, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-7

Markers:

人：CD3+, CD56-

小鼠: CD3+, CD49b-

磁珠分选kit：

人：

小鼠：

培养基：

NK T细胞

IL-2, IL-7, IL-15, CD137L, anti CD3, anti CD28

Markers:

人：CD3+, CD56+

小鼠：

γδ T细胞

IL-2, IL-7, IL-15, CD137L, anti CD3, anti CD28

CD4 naïve T细胞

IL-2, IL-7, IL-15, CD137L, anti CD3, anti CD28

Markers: CD3, CD4, TCRα/β, CD62L, CD197 (CCR7), CD45RA, CD45RB

Human:

CD4+CD45RA+CD45RO-, CD8-, CD14-, CD16-, CD19-, CD20-, CD36-, CD56-, CD66b-, CD123-, TCRγ/δ-, CD235a-

Th1细胞

IL-2, IL-12, IL-18, IL-27, IFN-γ,anti CD3, anti CD28,anti IL-4

Markers: CD3, CD4, CD119 (IFN-γ Ra), CD183 (CXCR3), CD195 (CCR5), CD218a (IL-18Ra)， LT-βR， CD366 (Tim-3)

Th2细胞

IL-2, IL-4, IL-6,IL-31,IL-33,TSLP, IL-25,

anti CD3, anti CD28, anti IFN-γ, anti-IL-12/IL-23P40

Markers: CD3, CD4, CD119 (IFN-γ Ra), CD193 (CCR3), CD194 (CCR4), CDw198 (CCR8)， CRTH2， IL-33Ra, CD365 (Tim-1)

Th17细胞

IL-2, TGF-β1, IL-1β, IL-6, IL-21, IL-23,anti CD3, anti CD28, anti IL-2, anti L-4, anti IFNγ

Markers: CD3, CD4, TCRα/β, CD161, CD194 (CCR4), CD196 (CCR6)， IL-23R

人：CD34⁺, CD90^+,, Lin^-, CD38^-/low, CD45RA^-, CD49f⁺

小鼠: Lin^-, CD117⁺, Sca-1⁺

人：CD19⁺

小鼠: CD19⁺

人：CD138⁺

小鼠：CD138⁺

人: CD3^-, CD16⁺, CD56+

小鼠: CD3^-, CD49b⁺

人：CD3⁺, CD56^-

小鼠: CD3⁺, CD49b^-

人：CD3⁺, CD56⁺

CD4⁺CD45RA⁺CD45RO^-, CD8-, CD14-, CD16^-, CD19^-, CD20^-, CD36^-, CD56^-, CD66b^-, CD123^-, TCRγ/δ^-, CD235a^-

Human: CD8⁺CD45RA⁺CCR7⁺CD45RO^-CD57^-CD56^-, CD4^-, CD14^-, CD16^-, CD19^-, CD20^-, CD36^-, CD94^-, CD123^-, CD244^-, TCRγ/δ^-, CD235a^-

人: CD42b⁺

小鼠: CD41⁺

人: CD62p⁺

小鼠: CD62p⁺

人: CD235a⁺

小鼠：Ter119⁺

人：CD14⁺, CD16±, CD64⁺

小鼠: CD11b^hi, CD115^hi, Gr-1^lo, Ly-6C^±