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犬类(狗)免疫细胞分型分析研究
流式细胞术是根据细胞表达的蛋白对细胞进行识别和表征。通过流式细胞术进行免疫表型分析是免疫学和临床诊断中的关键技术 。流式细胞术可同时分析多种标志物,其能力受限于抗体、结合物以及流式细胞仪性能的范围。在某些情况下,对犬样本进行免疫表型分析有助于准确了解动物的免疫功能状况
1. 犬类白细胞免疫表型标志物
犬类白细胞免疫表型标志物是规划表型分析检测指标的良好起点:
标志物 | 细胞类型 | 克隆号 | 货号 |
CD3 | T细胞 | CA17.2A12 | AD0103110 |
CD4 | 辅助性T细胞 | YKIX302.9 | AD2904110 |
CD5 | T细胞和一小部分B细胞 | YKIX322.3 | AD0605110 |
CD8α | 细胞毒性T细胞 | YCATE55.9 | AD0708110 |
CD18 | 白细胞 | YFC118.3 | AK0118110 |
CD19 | B细胞 | ||
CD20 | 成熟B细胞 | ||
CD21 | 成熟B细胞 | LT21 | AK1921110 |
CD25 | 活化淋巴细胞 | P4A10 | AD3025110 |
CD34 | 祖细胞/前体细胞 | 1H6 | AD0234110 |
CD44 | 造血细胞 | MEM-263 | AK0144110 |
CD45 | 白细胞 | YKIX716.13 | AD0145110 |
CD94 | NK细胞 | HP-3D9 | AK0394110 |
IgM | 未成熟/成熟B细胞 | ||
MHC II | 单核细胞、组织细胞、淋巴细胞 | YKIX334.2 | AD0111110 |
TCRαβ | αβ T细胞 | ||
TCRγδ | γδ T细胞 |
2. 犬类免疫细胞表型分析的不同检测方案
根据犬类免疫细胞表型的不同,可以设计不同的检测方案组合检测不同的细胞亚群:T细胞、辅助性T细胞、细胞毒性T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞和粒细胞等
2.1. 犬类T细胞三色表型分析
犬类T细胞基本分为:总T细胞、辅助T细胞和细胞毒性T细胞,可通过检测细胞表面抗原 CD3、CD4 和 CD8 来实现表型分析检测。使用了简单的三色荧光试剂盒,用于检测 T 细胞(CD3)、辅助 T 细胞(CD4)和细胞毒性 T 细胞(CD8)。犬嗜中性粒细胞也表达 CD4,并且与其它物种不同,犬在外周血中可出现 CD4+CD8+细胞(双阳性细胞)。
CD3-FITC
CD4-PE
CD8-APC
CD3+CD4+ 辅助T细胞、CD3+CD8+ 细胞毒性T细胞,或单独的 CD4+ 和 CD8+ T 细胞亚群
2.2 犬类免疫细胞五色表型分析
犬类T细胞、B细胞和单核细胞的五色表型分析:
T细胞 | CD3/CD4/CD8 |
B细胞 | CD21 |
单核细胞 | CD14 |
2.3 犬类免疫细胞九色表型分析
犬类免疫细胞:T细胞、B 细胞、 NK 细胞、单核细胞和粒细胞表型分析。
根据FSC和SSC区分淋巴细胞、单核细胞和粒细胞群,淋巴细胞亚群中MHC II +CD5+双阳性淋巴细胞,进一步表征MHC II +CD5+CD3+ T细胞,继而分析MHC II +CD5+CD3+ CD4+辅助和 MHC II +CD5+CD3+ CD8+细胞毒性 T 细胞,同时用CD5和CD21表征CD5 -CD21+ B细胞。CD4- CD94 +表征NK/NKT细胞群。粒细胞中的中性粒细胞亚群CD4+ CD18+ 双阳性细胞。单核细胞:MHC II+CD14+CD18+。
3. 犬类免疫细胞分布情况
细胞名称 | 标志物 | 比例分布(单个核细胞中的比例) |
T淋巴细胞 | CD3+ | 55±14.1% |
CD4辅助T细胞 | CD3+CD4+ | 32.1±9% |
CD8细胞毒性T淋巴细胞 | CD3+CD8+ | 13.5±6.6% |
TCRγδ淋巴细胞 | CD3+TCRγδ+ | 1.6±1.3% |
CD4+CD8+双阳性淋巴细胞 | 1.4±4.2% |