组织透明技术是利用化学或物理的原理与方法将大块组织或完整器官透明化处理的技术，使得光学仪器可直接对组织或器官内的细胞等结构进行观察研究。它可以在不破坏器官完整性的前提下，观察其内在显微结构，避免了切片间的信息丢失，真正实现了细胞等结构的三维成像。目前很多研究人员遇到了各种无法突破的技术瓶颈，限制了他们对目标组织的观察，为此SunJin Lab在实现组织透明方面给我们带来了新希望。

RapiClear®组织透明剂

 

     RapiClear是一种水溶性透明试剂，可以提高荧光或非荧光标记的生物标本的可视化。 它可用于观察哺乳动物、植物、昆虫组织中的细胞形态，以及生物材料如壳聚糖和纤维素等。 采用RapiClear可以使样本不透明而导致靶标不清晰的问题迎刃而解了。口说无凭，眼见为实→

 

图1.果蝇脑图像 （A）果蝇神经元的表达模式。 神经元树枝状结构由mCD8 :: GFP（绿色）标记， 突触前末端用抗突触结合蛋白:: HA Ab（白色）标记，脑结构通过抗DLG免疫染色（蓝色）复染。  （B）光学投影神经元的三维可视化如图A所示。三个轴平行于果蝇脑的主轴。

 

图2.RapiClear1.49透明处理550um小鼠脊髓切片表达YFP神经元的深度成像。 用25倍镜头拍摄。  （A）矢状剖面。 （B）冠状切面。 样品由中央研究院的Chia-Ming Lee博士提供。

 

图3.为在550um小鼠脑切片海马神经元中表达YFP的深度编码投影图像。  （A）样品用RapiClear1.49透明剂透明，25x镜头成像。  （B）用RapiClear1.52透明样品，63x油镜头成像。 样品由中央研究院的Chia-Ming Lee博士提供。

 

图4.胰岛微结构，血管系统和神经支配的成像。 绿色（标记凝集素）血管， 蓝色胰岛（标记胰岛素）和洋红色神经（标记TUJ1）。 图片由Shiue Cheng教授（Tony）Tang提供。

浏览了这么多“艺术品”，是不是很想认识它的“创造者RapiClear”，先看看RapiClear的特点：

兼容性：兼容各种内源荧光蛋白，亲脂示踪剂，核酸染色剂和Alexa Fluor染料。

简便：样品可以直接从缓冲溶液转移到RapiClear试剂中进行透明化。如果样品重新浸入缓冲溶液中，透明效果是可逆的。

 

RapiClear适用于什么样本？该如何选择使用？

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样品				产品
动物	昆虫	果蝇，蝗虫，蟑螂等的组织		Rapiclear 1.47
	小鼠	组织切片（厚度）	＜0.5mm	Rapiclear 1.47
			>0.5mm	Rapiclear 1.49 Rapiclear 1.52
		器官	脑，肾脏和心脏	Rapiclear 1.55
			胃，肠，肝，肺，胰腺，皮肤等	Rapiclear 1.52
	大鼠	组织切片（厚度）	＜0.5mm	Rapiclear 1.47
			>0.5mm	Rapiclear 1.49 Rapiclear 1.52
	斑马鱼	幼鱼		Rapiclear 1.47
		成年鱼		Rapiclear 1.49
生物材料	Matrigel,collagen matrix,agarose			Rapiclear 1.47
植物	拟南芥（A.thaliana），水稻，烟草等的组织			Rapiclear 1.47

 

不同样本透明所需时间：

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iSpacer®（成像垫片）

    

      透明剂的使用还需要搭配一种简单易用的小工具即 iSpacer，它能让您的实验操作更方便。 iSpacers由不同厚度的胶带制成。 通过简单地将间隔物按压到显微镜载玻片或盖玻片上，形成密封的防水孔以包含RapiClear®并防止蒸发。 在不压缩的情况，这些孔的形状比较稳定，其厚度足以支撑样品自由浮动，以便在分辨样品内部的精细结构。 样品和垫片可以夹在两个盖玻片之间。 同时，iSpacers可以堆叠到不同的深度，直接用于光，荧光或共聚焦显微镜。

 

面对不同类型的样本，iSpacer的规格也是多种多样：

 

货号	产品
IS001/IS010	单孔，约100μl工作体积，26×16mm，0.2mm深，50片/250片
IS002/IS011	单孔，约250μl工作体积，26×16mm，0.5mm深，50片/250片
IS003/IS012	单孔，约500μl工作体积，26×16mm，1.0mm深，50片/250片
IS004/IS013	单孔，约1.5ml工作体积，26×16mm，3.0mm深，10片/100片
IS005/IS014	单孔，约3.5ml工作体积，26×16mm，7.0mm深，10片/50片
IS006/IS015	四孔，约12μl/孔 工作体积，7mm直径，0.18mm深，50片/250片
IS007/IS016	四孔，约15μl/孔 工作体积，7mm直径，0.2mm深，50片/250片
IS008/IS017	四孔，约35μl/孔 工作体积，7mm直径，0.5mm深，50片/250片
IS009/IS018	四孔，约75μl/孔 工作体积，7mm直径，1.0mm深，50片/250片

 

RapiClear® CS mounting solution&mounting gel（透明剂&封片胶）

 

      SunJin Lab又推出一种更适合较大器官的透明剂，即使在几毫米的深度，样品图像质量也可以达到细胞水平分辨率。RapiClear CS是一种水溶性透明剂，其折射率与CLARITYTM（斯坦福大学）水凝胶组织杂交体相同（RI = 1.45nD）。 浸入RapiClear CS后，脂质提取的水凝胶组织变得均匀透明。 请欣赏下图：

 

 

图5.用抗TH抗体标记的小鼠脑，采用Lightsheet Z1（Zeiss）成像揭示了多巴胺能神经元网络。

 

图6. RapiClear CS透明剂处理前后，Thy1-eYFP小鼠脑的透射白光和荧光图像。